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MDCK-RFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:08:17
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详细内容
MDCK-RFP-Puro稳转株
英文名称 | MDCK-RFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-O1106 |
中文名称 | RFP 标记的 MDCK 稳转株 |
Lot number | MDCK-10A2P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | MEM + 10％ FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
MDCK-RFP-Puro 稳转株概述
MDCK 细胞是犬肾上皮细胞（Madin-Darby Canine Kidney Cells）的简称，常用于病毒学研究（如流感病毒增殖）、药物代谢研究等。稳转株（Stable Cell Line）是指通过基因工程手段将外源基因稳定整合到细胞基因组中，使其能够长期稳定表达目标蛋白的细胞株。
MDCK-RFP-Puro 稳转株是在 MDCK 细胞中引入了两种关键元件的稳转细胞株：
RFP（Red Fluorescent Protein，红色荧光蛋白）：作为报告基因，用于直观监测细胞状态、基因表达位置或细胞示踪，便于通过荧光显微镜或流式细胞术等手段进行观察和筛选。
Puro（Puromycin，嘌呤霉素）：作为筛选标记，赋予细胞对嘌呤霉素的抗性。在细胞转染后，通过嘌呤霉素筛选可保留成功整合外源基因的细胞，淘汰未成功转染的细胞，从而获得稳定表达 RFP 的单克隆细胞株。
构建流程与关键技术
1. 载体构建
构建含有RFP 基因和Puro 抗性基因的重组质粒载体（如慢病毒载体或质粒载体），通常两者由不同启动子驱动，确保独立表达。
示例载体结构：
plaintext
[启动子1] → RFP基因 → [终止子1]
[启动子2] → Puro抗性基因 → [终止子2]
2. 细胞转染
通过病毒感染（如慢病毒、逆转录病毒）或化学转染（如脂质体转染）将重组载体导入 MDCK 细胞。
病毒感染效率较高，适用于难转染的细胞类型，且外源基因整合更稳定。
3. 嘌呤霉素筛选
转染后培养细胞，加入嘌呤霉素进行筛选。未成功整合抗性基因的细胞会被杀死，存活细胞即为稳定表达 RFP 和 Puro 抗性的克隆。
通常需持续筛选 2–4 周，直至获得单克隆细胞株。
4. 单克隆化与鉴定
通过有限稀释法或流式细胞分选获得单细胞克隆，确保每个克隆源自单个细胞。
鉴定方法：
荧光显微镜观察：检测 RFP 表达的均匀性和强度。
Western blot：验证 RFP 蛋白的稳定表达。
基因组 PCR：确认外源基因已整合到细胞基因组中。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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