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SV40-MES-13-GFP-Puro稳转株
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详细内容
SV40-MES-13-GFP-Puro稳转株
英文名称 | SV40-MES-13-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-M1167 |
中文名称 | GFP 标记的 SV40-MES-13 稳转株 |
Lot number | SV40-MES-13-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 成纤维细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | (1)构建目的基因过表达慢病毒重组质粒,并包装慢病毒; (2)慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞; (3)用最佳浓度药物对细胞株进行筛选,获得混合稳转株; (4)稳转株质检(COA)。 |
完全培养基 | DMEM : F-12(3 : 1)+ 5% FBS + 1% P/S(选择添加) |
培养条件 | (1) 气相:95%空气,5% CO2;(2) 温度:37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |

1. 基本概念
细胞背景:
SV40-MES-13 细胞是一种源自小鼠肾小球系膜细胞的永生化细胞系,通过导入猿猴空泡病毒 40(SV40)的大 T 抗原(Large T Antigen)实现永生化,保留了系膜细胞的特性,常用于肾脏疾病、细胞增殖和信号通路研究。
GFP 标记:
绿色荧光蛋白(GFP)通过基因工程手段稳定整合到细胞基因组中,使细胞在荧光显微镜下发出绿色荧光,便于实时观察细胞形态、定位及示踪(如细胞迁移、分化研究)。
嘌呤霉素(Puro)抗性:
细胞稳定表达嘌呤霉素抗性基因,可在含有嘌呤霉素的培养基中存活,用于筛选和维持稳转株(防止未转染细胞过度生长)。
2. 构建流程
载体构建:
构建含 GFP 编码序列和嘌呤霉素抗性基因的重组质粒(如慢病毒或逆转录病毒载体),通常由 CMV 等组成型启动子驱动表达。
细胞转染:
通过病毒感染(常用慢病毒)或化学转染法将载体导入 SV40-MES-13 细胞。
筛选与鉴定:
加入嘌呤霉素进行压力筛选,存活细胞为成功整合载体的单克隆或多克隆稳转株。
通过荧光显微镜观察 GFP 表达强度,流式细胞术检测荧光阳性率,Western blot 验证 GFP 蛋白表达。
3. 应用场景
细胞生物学研究:
追踪系膜细胞在共培养体系中的迁移或与其他细胞(如足细胞)的相互作用。
观察细胞骨架动态(如与 GFP-actin 融合蛋白结合)或细胞器定位(如 GFP 标记线粒体)。
药物筛选与毒性评估:
通过 GFP 荧光强度变化监测药物对细胞形态或增殖的影响(如肾小球硬化模型中的细胞损伤研究)。
动物体内示踪:
将稳转株移植到小鼠体内,利用活体成像技术观察细胞在肾脏组织中的分布和存活情况(需注意免疫缺陷动物模型的使用)。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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