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THP-1-GFP-Puro+ffluc单克隆株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/22 8:33:24
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详细内容
THP-1-GFP-Puro+ffluc单克隆株
产品名称 | THP-1-ffluc1-GFP-Puro 单克隆细胞株 |
产品货号 | XY-H2154 |
中文名称 | ffluc1 和 GFP 双标的 THP-1 单克隆细胞株 |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 淋巴母细胞样 |
生长特性 | 悬浮生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转细胞株； （4）采用无限稀释法筛选单克隆细胞株； （5）单克隆细胞株质检（COA）。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 10% FBS + 0.05mM β-巯基乙醇 |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
共享方式 | 公益性共享 |
一、细胞株背景
亲本细胞 THP-1
THP-1 是源自人类急性单核细胞白血病的永生化细胞系，具有单核细胞 / 巨噬细胞的特性，常用于免疫、炎症、癌症等研究。其特点包括：
悬浮生长，易于培养和传代。
可通过诱导剂（如 PMA）分化为类似巨噬细胞的表型。
基因改造内容
GFP（绿色荧光蛋白）：通过慢病毒或质粒载体导入，使细胞表达 GFP，便于通过荧光显微镜或流式细胞术进行实时观察和分选。
Puro（嘌呤霉素抗性基因）：用于筛选成功转染的细胞，在培养基中添加嘌呤霉素可淘汰未整合目的基因的细胞。
ffluc（萤火虫荧光素酶）：引入荧光素酶基因后，细胞可在注射荧光素底物后产生生物发光，适用于活体成像（如小鼠体内肿瘤或免疫细胞追踪）。
单克隆株的意义
单克隆株是通过有限稀释法或单细胞分选技术获得的纯克隆细胞群，具有遗传背景均一、目的基因表达水平一致的特点，避免了多克隆细胞的异质性干扰。
二、主要应用场景
荧光成像与追踪
体外研究：利用 GFP 荧光标记，观察细胞形态、迁移、吞噬等动态过程（如与病原体共培养时的感染机制）。
体内研究：通过 ffluc 生物发光成像，追踪细胞在动物模型中的分布（如肿瘤微环境中的免疫细胞浸润）、增殖或药物响应。
基因表达与功能研究
作为报告细胞株，用于检测特定启动子活性（如将 GFP 连接到目标基因启动子下游，反映基因转录水平）。
通过敲除或过表达其他基因，结合荧光标记，分析基因对细胞功能的影响（如凋亡、分化）。
药物筛选与毒性评估
利用荧光信号强度变化，高通量筛选影响细胞存活、代谢或信号通路的化合物（如抗肿瘤药物对 THP-1 细胞的杀伤效果）。
免疫相关研究
模拟单核细胞 / 巨噬细胞在炎症或感染中的行为，结合荧光标记研究免疫细胞与病原体、肿瘤细胞的相互作用。
三、培养与操作要点
培养基与培养条件
常用培养基：RPMI 1640 培养基，添加 10% 胎牛血清（FBS）、1% 双抗（青霉素 / 链霉素），维持 pH 7.2⁻⁷.4。
培养环境：37℃、5% CO2 ，悬浮培养时需定期传代（通常每 2-3 天，细胞密度维持在 1×10⁶-1×10⁷ cells/mL）。
抗生素筛选与维持
初始筛选：转染后使用嘌呤霉素（Puro，浓度通常为 1-5 µg/mL，需预实验优化）处理 1-2 周，直至未转染细胞全部死亡。
长期培养：可维持低浓度嘌呤霉素（如 0.5 µg/mL）以防止目的基因丢失。
荧光检测注意事项
GFP 激发波长约 488 nm，发射波长 509 nm，需匹配荧光显微镜或流式细胞仪的滤光片。
ffluc 检测需添加荧光素底物（如 D - 荧光素钾盐），通过活体成像系统（如 IVIS）检测光子信号。
单克隆株的验证
荧光表达均一性：通过流式细胞术检测 GFP 阳性率，确保单克隆株中几乎所有细胞均表达荧光蛋白。
ffluc 活性验证：通过荧光素酶活性检测试剂盒（如 Promega 试剂盒）确认酶活性。
功能稳定性：传代多次后（如 20 代以上），验证荧光强度和细胞功能是否保持一致。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
热门标签：THP-1-GFP-Puro+ffluc单克隆株,ffluc1,和,GFP,双标的,THP-1,单克隆细胞株,,THP-1,单克隆细胞株
