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PC-3-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:49
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详细内容
PC-3-GFP-Puro稳转株
英文名称 | PC-3-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H1136 |
中文名称 | GFP 标记的 PC-3 稳转株 |
Lot number | PC-3-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | F12K + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
一、基本概念
1. 背景细胞株：PC-3 细胞
来源：PC-3 是一种人前列腺癌细胞株，源于骨转移灶，具有高侵袭性和转移性，常用于前列腺癌相关研究。
特性：贴壁生长，增殖能力较强，缺乏雄激素受体表达，对雄激素剥夺疗法不敏感。
2. 关键元件
GFP（绿色荧光蛋白）：作为报告基因，表达后使细胞在荧光显微镜下发出绿色荧光，便于实时追踪细胞位置、形态及迁移等动态过程，或用于流式细胞术分选。
Puro（嘌呤霉素）：作为筛选标记，赋予细胞对嘌呤霉素的抗性。通过在培养基中添加嘌呤霉素，可选择性保留成功整合目标基因的稳转细胞，淘汰未整合的细胞。
3. 稳转株定义
通过病毒感染（如慢病毒、逆转录病毒）或质粒转染等方式，将含 GFP 和 Puro 抗性基因的表达载体稳定整合到 PC-3 细胞基因组中，经筛选后获得的能稳定表达 GFP 且持续抵抗嘌呤霉素的细胞株。
二、构建流程
载体构建
构建含 GFP 编码序列和 Puro 抗性基因的重组质粒（如 pLVX-GFP-Puro），通常由启动子（如 CMV）驱动 GFP 表达。
细胞转染 / 感染
病毒感染法：适用于难转染的细胞（如 PC-3）。将重组质粒与包装质粒共转染 293T 细胞，生产携带 GFP 和 Puro 基因的慢病毒，再感染 PC-3 细胞。
质粒转染法：通过脂质体或电穿孔等方法将质粒直接导入 PC-3 细胞。
筛选与单克隆化
感染 / 转染后，用嘌呤霉素（浓度需预实验优化，如 1-5 µg/mL）处理细胞，未整合抗性基因的细胞死亡，存活细胞为初步稳转株。
通过有限稀释法或流式细胞术分选单克隆细胞，扩大培养后获得纯合稳转株。
鉴定
荧光检测：荧光显微镜下观察 GFP 表达强度及均一性。
Western blot：检测 GFP 蛋白表达水平。
抗性验证：撤去嘌呤霉素后，验证细胞是否维持抗性。
三、应用场景
1. 细胞成像与示踪
体内研究：将稳转株注射到动物模型（如裸鼠）中，通过活体荧光成像观察肿瘤生长、转移及药物分布。
体外研究：实时监测细胞迁移、侵袭或细胞间相互作用（如与免疫细胞共培养）。
2. 基因功能研究
作为工具细胞株，用于过表达或敲低目的基因（需与其他载体共转染，如 shRNA 质粒），结合 GFP 标记追踪基因操作后的细胞表型变化。
3. 药物筛选与毒性评估
在 96 孔板中培养稳转株，加入不同药物后，通过荧光强度变化（如细胞存活率）或显微镜观察（如凋亡形态）快速评估药物疗效或毒性。
4. 细胞分选与富集
利用流式细胞术（FACS）根据 GFP 荧光强度分选高表达细胞，用于建立均一性更好的细胞模型。
四、优势与局限性
优势：
稳定性：基因整合至基因组，可长期传代并维持 GFP 表达和药物抗性。
可视化：GFP 标记无需外源性底物，操作简便，适用于实时动态观察。
筛选高效：嘌呤霉素筛选周期短（通常 1-2 周），可快速获得纯合细胞群。
局限性：
位置效应：基因整合位点可能影响 GFP 表达水平，需通过单克隆筛选获得稳定表达克隆。
细胞特性改变：外源基因整合可能潜在影响 PC-3 细胞的原有生物学行为（如增殖速率、侵袭能力），需通过功能实验验证。
荧光干扰：GFP 信号可能与其他荧光标记（如 RFP）存在光谱重叠，需合理设计实验。
五、培养与维护要点
培养基：通常使用含 10% 胎牛血清（FBS）的 RPMI 1640 培养基，添加青霉素 / 链霉素（100 U/mL）。
嘌呤霉素维持：根据细胞状态，可在常规培养中添加低浓度嘌呤霉素（如 0.5-1 µg/mL）以防止抗性丢失。
传代注意：避免过度汇合（建议 80%-90% 汇合时传代），胰酶消化时间不宜过长，以免损伤细胞。
冻存与复苏：冻存液建议使用 90% FBS+10% DMSO，液氮保存；复苏时快速解冻，避免 GFP 表达受冻存影响。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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