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A549-GFP-Puro+ffluc单克隆株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/22 8:33:24
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详细内容
A549-GFP-Puro+ffluc单克隆株
产品名称 | A549-GFP-ffluc1-Puro 单克隆株 |
产品货号 | XY-H2161 |
中文名称 | ffluc 和 GFP 双标的 A549 单克隆株 |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
Lot number | A549-24A6S |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）采用无限稀释法筛选单克隆株； （5）单克隆株质检（COA）。 |
完全培养基 | F-12K + 10 % FBS + 1 % P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
1. 背景与构建
亲本细胞：A549 细胞源自人肺腺癌，是肺癌研究中最常用的细胞系之一，具有贴壁生长特性，易于培养和操作。
基因修饰：
GFP（绿色荧光蛋白）：通过慢病毒或质粒载体稳定转染，使细胞持续表达 GFP，便于通过荧光显微镜或流式细胞术进行实时可视化追踪和细胞分选。
Puro（嘌呤霉素抗性基因）：用于筛选成功转染的细胞，未整合抗性基因的细胞会被嘌呤霉素杀死，确保单克隆株的纯合性。
ffluc（萤火虫荧光素酶）：引入荧光素酶基因后，细胞可在注射荧光素底物后通过生物发光成像（BLI）技术进行体内肿瘤生长监测或转移研究（如小鼠模型中的活体成像）。
单克隆株：通过有限稀释法或单细胞分选获得单个细胞克隆，确保所有细胞的遗传背景一致，避免混合细胞群带来的实验误差。
2. 核心应用场景
细胞示踪与成像：
体外：利用 GFP 荧光直接观察细胞形态、迁移或共培养中的细胞间相互作用。
体内：将细胞接种到免疫缺陷小鼠（如裸鼠）体内后，通过荧光或生物发光成像技术实时监测肿瘤形成、生长动力学及转移灶分布（需配合活体成像系统）。
药物筛选与毒性评估：
基于 GFP 的荧光强度变化或细胞存活率（如 CCK-8、MTT 法），高通量筛选抗癌药物或评估化合物对肺癌细胞的抑制效果。
Puro 抗性基因可用于构建稳定表达其他基因的细胞模型（如联合 shRNA 慢病毒构建基因敲低细胞株）。
分子机制研究：
结合 ffluc 的生物发光信号，定量分析基因表达调控、信号通路激活或药物作用的时间依赖性效应（如荧光素酶报告基因实验）。
单克隆株的均一性有助于排除细胞异质性对实验结果的干扰，适用于基因编辑（如 CRISPR-Cas9）后的功能验证。
3. 培养与维护要点
培养基：通常使用含 10% 胎牛血清（FBS）的 RPMI 1640 培养基，添加 1% 青霉素 - 链霉素双抗，维持 pH 7.2⁻⁷.4。
抗性筛选：在单克隆株建立初期，需在培养基中添加嘌呤霉素（Puro）（浓度一般为 1-5 µg/mL，需预实验优化），稳定传代后可逐步降低或去除抗性压力。
GFP 表达检测：定期通过荧光显微镜观察 GFP 荧光强度，确保标记基因未发生沉默或丢失。
冻存与复苏：冻存液建议使用 90% FBS+10% DMSO，液氮保存；复苏时避免反复冻融，以防细胞活力下降。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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