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详细内容
DoHH2-GFP-Puro稳转株
英文名称 | DoHH2-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H2045 |
中文名称 | GFP 标记的 DoHH2 稳转株 |
Lot number | DoHH2-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | B细胞淋巴瘤 |
生长特性 | 悬浮生长 |
细胞株 构建流程 | (1)构建目的基因过表达慢病毒重组质粒,并包装慢病毒; (2)慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞; (3)用最佳浓度药物对细胞株进行筛选,获得混合稳转株; (4)稳转株质检(COA)。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 10%FBS |
培养条件 | (1) 气相:95%空气,5% CO2;(2) 温度:37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |

1. 基础背景
亲本细胞系(DoHH2):
DoHH2 细胞系来源于人类弥漫性大 B 细胞淋巴瘤(DLBCL),属于 B 淋巴细胞恶性肿瘤模型,常用于淋巴瘤相关研究(如信号通路、靶向治疗等)。
GFP(绿色荧光蛋白):
作为报告基因,GFP 通过基因重组技术整合到细胞基因组中,使细胞表达绿色荧光蛋白,便于通过荧光显微镜或流式细胞术进行实时观察、追踪或分选。
Puro(嘌呤霉素):
是一种抗生素,用于稳转株的筛选。通过将携带Puro 抗性基因的质粒转染细胞,只有成功整合目的基因(如 GFP)的细胞才能在含嘌呤霉素的培养基中存活,从而获得稳定表达 GFP 的细胞株。
2. 构建流程
载体设计:
构建包含GFP 基因和Puro 抗性基因的重组质粒(如慢病毒载体或逆转录病毒载体),确保两者在同一表达单元中,实现共表达。
细胞转染:
通过病毒感染(常用慢病毒)或化学转染法将重组质粒导入 DoHH2 细胞。病毒载体因转染效率高、整合稳定,是构建稳转株的常用工具。
抗生素筛选:
转染后的细胞在含嘌呤霉素的培养基中培养,未成功整合质粒的细胞被杀死,存活细胞即为稳定表达 GFP 的单克隆或多克隆细胞株。
验证与扩增:
通过荧光显微镜观察 GFP 表达强度,流式细胞术检测阳性率,确保稳转株的均一性和稳定性,随后进行扩大培养或冻存。
3. 应用场景
细胞成像与追踪:
GFP 的荧光特性使其可用于实时观察细胞形态、迁移、分化或与其他分子的相互作用(如通过荧光共振能量转移 FRET 技术)。
药物筛选与毒性评估:
在抗肿瘤药物研究中,可通过 GFP 信号强度或细胞存活率(结合 MTT、CCK-8 等方法)评估药物对 DoHH2 细胞的抑制效果。
基因功能研究:
若 GFP 与目的基因(如致癌基因或抑癌基因)共表达,可通过稳转株分析基因过表达或敲低对细胞增殖、凋亡、周期等表型的影响。
体内实验(如动物模型):
将稳转株注射至免疫缺陷小鼠体内,通过活体荧光成像技术监测肿瘤生长、转移等过程。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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