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A20-GFP-Puro稳转株
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详细内容
A20-GFP-Puro稳转株
英文名称 | A20-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-M1183 |
中文名称 | GFP 标记的 A20 稳转株 |
Lot number | A20-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T12.5细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 淋巴母细胞样 |
生长特性 | 悬浮生长 |
细胞株 构建流程 | (1)构建目的基因过表达慢病毒重组质粒,并包装慢病毒; (2)慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞; (3)用最佳浓度药物对细胞株进行筛选,获得混合稳转株; (4)稳转株质检(COA)。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 10% FBS + 0.05 mM β -巯基乙醇 |
培养条件 | (1) 气相:95%空气,5% CO2;(2) 温度:37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |

一、核心组成与原理
1. 细胞背景:A20 细胞
来源:A20 细胞是源自小鼠 B 淋巴瘤的永生化细胞系,具有 B 细胞特性,常用于免疫、炎症和肿瘤相关研究。
特点:增殖能力强,易于培养,适合作为稳转株的宿主细胞。
2. 关键元件
GFP(绿色荧光蛋白):
作为报告基因,表达后发出绿色荧光,便于通过荧光显微镜、流式细胞术等实时观察细胞内基因定位、表达水平及细胞追踪。
Puro(嘌呤霉素抗性基因):
作为筛选标记,赋予细胞对嘌呤霉素的抗性。在稳转株构建过程中,未成功整合目的基因的细胞会被嘌呤霉素杀死,从而筛选出稳定表达目标基因的细胞株。
二、构建流程
载体构建:
将 GFP 基因和 Puro 抗性基因插入到合适的表达载体(如质粒)中,通常与目的基因(如需稳定表达的靶基因)共表达,形成 “报告基因 + 筛选标记 + 目的基因” 的复合载体。
细胞转染:
通过脂质体转染、电穿孔等方法将载体导入 A20 细胞。
抗生素筛选:
转染后的细胞在含有嘌呤霉素的培养基中培养,未成功整合载体的细胞死亡,存活细胞即为稳定整合载体的单克隆细胞株。
单克隆鉴定:
通过有限稀释法或流式细胞术分选单克隆细胞,利用荧光检测(GFP 表达)和分子生物学方法(如 PCR、Western blot)验证目的基因的稳定表达。
三、应用场景
1. 基因表达与功能研究
通过 GFP 荧光强度监测目的基因的表达水平,分析基因在细胞增殖、凋亡、信号通路中的作用。
示例:研究某肿瘤相关基因在 A20 细胞中的持续表达对细胞侵袭能力的影响。
2. 细胞成像与追踪
利用 GFP 的荧光特性,在活细胞成像中实时观察细胞迁移、分化或与其他细胞 / 分子的相互作用。
应用场景:肿瘤微环境研究、免疫细胞动态追踪。
3. 药物筛选与毒性分析
Puro 抗性筛选确保细胞稳定表达目标基因,可用于高通量药物筛选,评估药物对特定基因表达细胞的作用效果或毒性。
例如:筛选针对 B 淋巴瘤细胞的靶向药物,通过 GFP 信号变化判断药物对基因表达的影响。
4. 动物模型构建
将稳转株注射到小鼠体内,利用 GFP 荧光进行活体成像,追踪肿瘤生长或免疫细胞分布(如构建荷瘤小鼠模型)。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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