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Nthyori3-1-RFP-Puro稳转株
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详细内容
Nthyori3-1-RFP-Puro稳转株
英文名称 | Nthyori3-1-RFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H2089 |
中文名称 | RFP 标记的 Nthyori3-1 稳转株 |
Lot number | Nthyori3-1-10A2P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | (1)构建目的基因过表达慢病毒重组质粒,并包装慢病毒; (2)慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞; (3)用最佳浓度药物对细胞株进行筛选,获得混合稳转株; (4)稳转株质检(COA)。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 10% FBS + 1% P/S(选择添加) |
培养条件 | (1) 气相:95%空气,5% CO2;(2) 温度:37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |

一、核心概念解析
1. Nthyori3-1 细胞株
来源:可能是一种甲状腺相关细胞株,具体来源需结合研究背景确定(如人甲状腺细胞、大鼠甲状腺细胞等)。
应用:常用于甲状腺疾病、细胞生物学、基因表达调控等领域的研究。
2. RFP(红色荧光蛋白)
性质:一种荧光标记蛋白,在特定波长光激发下可发出红色荧光,常用于细胞追踪、蛋白定位、基因表达示踪等实验。
作用:通过将 RFP 基因与目标基因共表达,可直观观察细胞内目标基因的表达情况或细胞的存活、迁移等动态过程。
3. Puro(嘌呤霉素)
作用:是一种抗生素,可通过抑制蛋白质合成杀死原核和真核细胞。在基因工程中,常作为筛选标记(抗性基因)使用。
稳转株筛选原理:构建的载体中含 Puro 抗性基因,转入细胞后,未成功整合目的基因的细胞会被嘌呤霉素杀死,存活细胞即为稳定表达目标基因(如 RFP)的稳转株。
4. 稳转株(稳定转染细胞株)
定义:通过基因转染技术(如病毒感染、质粒转染)将外源基因(如 RFP 基因 + Puro 抗性基因)整合到细胞基因组中,使外源基因能在细胞中长期稳定表达的细胞群体。
特点:外源基因可随细胞分裂传递给子代细胞,适用于需要长期研究基因功能或蛋白表达的实验(如体内成瘤实验、长期细胞培养观察)。
二、构建流程与应用场景
1. 构建流程(示例)
载体构建:将 RFP 基因与 Puro 抗性基因插入到合适的载体(如质粒、病毒载体)中,形成重组表达载体。
转染细胞:通过脂质体转染、电穿孔或病毒感染(如慢病毒、腺相关病毒)将载体导入 Nthyori3-1 细胞。
筛选稳转株:使用嘌呤霉素对转染后的细胞进行筛选,存活细胞即为成功整合外源基因的稳转株。
鉴定与扩增:通过荧光显微镜观察 RFP 表达情况,利用有限稀释法或流式细胞术筛选单克隆细胞,扩大培养后获得纯稳转株。
2. 应用场景
细胞示踪与成像:利用 RFP 荧光标记,在活体成像或组织切片中追踪 Nthyori3-1 细胞的分布和行为(如肿瘤细胞迁移、免疫细胞相互作用)。
药物筛选与毒性研究:通过稳转株检测药物对细胞的影响(如增殖抑制、凋亡诱导),Puro 抗性可确保细胞在长期药物处理中稳定存活。
基因功能研究:结合 RNA 干扰(shRNA)或过表达技术,利用稳转株研究特定基因在甲状腺细胞中的功能(如信号通路调控、细胞周期影响)。
三、注意事项
细胞特性验证:需确认稳转株的 RFP 表达强度、稳定性及细胞形态、增殖能力是否与野生型 Nthyori3-1 细胞一致,避免外源基因插入影响细胞原有功能。
筛选浓度优化:嘌呤霉素的筛选浓度需根据细胞类型预实验确定,浓度过低可能导致非稳转细胞存活,过高则可能杀死阳性细胞。
生物安全:若使用病毒载体构建稳转株,需遵循生物安全操作规范,避免病毒泄漏。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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