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Panc 03.27-RFP-Puro稳转株

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品牌名称：$brandModel.Title型号：原产地：中国大陆更新时间：2026/10/22 8:33:24

产品摘要：Panc 03.27-RFP-Puro稳转株于 1995 年从一位 65 岁白人女性胰腺腺癌患者的胰腺中分离得到，可用于癌症研究。该细胞系由 E.M. Jaffee 保存，其细胞倍增时间约为 37.5 小时。Panc 03.27 属于胰腺腺癌上皮细胞系，源自胰腺头部原发性肿瘤切除组织。从分子亚型来看

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Panc 03.27-RFP-Puro稳转株

英文名称	Panc 03.27-RFP-Puro polyclonal stable cell line
产品货号	XY-H2074
中文名称	RFP 标记的 Panc 03.27 稳转株
Lot number	Panc 03.27-10A2P
细胞规格	复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 10⁶ 细胞冻存细胞
细胞形态	上皮细胞样
生长特性	贴壁生长
细胞株构建流程	（1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒；（2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞；（3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株；（4）稳转株质检（COA）。
完全培养基	RPMI-1640 + 15％ FBS + 10ug/ml 胰岛素 + 1% P/S（选择添加）
培养条件	(1) 气相：95%空气，5% CO₂；(2) 温度：37 ℃。
细胞冻存	无血清冻存液
存储条件	液氮

一、Panc 03.27 细胞系背景

Panc 03.27 是一种上皮细胞系，于 1995 年从一位 65 岁白人女性胰腺腺癌患者的胰腺中分离得到，可用于癌症研究。该细胞系由 E.M. Jaffee 保存，其细胞倍增时间约为 37.5 小时。Panc 03.27 属于胰腺腺癌上皮细胞系，源自胰腺头部原发性肿瘤切除组织。从分子亚型来看，属于外分泌腺癌（DepMap）。其生长的基础培养基为 ATCC 配制的 RPMI-1640 培养基（目录号 30 - 2001），完整生长培养基需在基础培养基中添加 5%（v/v）二甲基亚砜（DMSO，ATCC 4 - x）。也有文献指出，完整培养基配方为 RPMI-1640 培养基 + 10 单位 /ml 人重组胰岛素 + 15% 胎牛血清（FBS）。细胞冻存液则是完整生长培养基加上 5% DMSO 。

二、稳转株构建原理

稳转株即稳定表达细胞株，是基于某一细胞系构建的能够持续过表达或干扰某特定基因的细胞系。构建 Panc 03.27 - RFP - Puro 稳转株，一般是利用慢病毒感染的方式。慢病毒载体是在 HIV - 1 病毒基础上改造而成的病毒载体系统，能高效将目的基因导入动物和人的原代细胞或细胞系。以构建 Panc 03.27 - RFP - Puro 稳转株为例，首先将红色荧光蛋白（RFP）基因克隆到带有嘌呤霉素（Puro）抗性的载体上，构建成重组载体。然后利用包装辅助载体 pGag/Pol 和 pRev、包膜载体 pVSV - G 与重组载体一起在包装细胞中进行病毒包装，产生携带 RFP 基因的慢病毒颗粒。将这些慢病毒颗粒感染 Panc 03.27 细胞，慢病毒基因组能够高效整合到 Panc 03.27 细胞的染色体中。随后使用嘌呤霉素进行筛选，由于只有成功整合了携带 RFP 基因和 Puro 抗性基因载体的细胞才能在含有嘌呤霉素的培养基中存活，经过一段时间的筛选，即可获得稳定表达 RFP 的 Panc 03.27 - RFP - Puro 稳转株。

三、稳转株优势

与瞬时转染相比，瞬时转染中外源 DNA/RNA 不会整合到宿主染色体中，虽可达到高水平表达，但通常只持续几天，一般 96h 内就会失效。而构建 Panc 03.27 - RFP - Puro 稳转株后，红色荧光蛋白基因稳定整合在细胞染色体上，细胞可长期稳定表达红色荧光蛋白，大大降低了频繁转染的成本，方便进行长期的实验研究。同时，瞬转会引入不可预期的拷贝数表达（往往瞬时表达较高），导致因为人为因素造成实验结果的不精确，构建稳定株可以帮助筛选到拷贝数适量的细胞进行实验研究。此外，Panc 03.27 - RFP - Puro 稳转株还可用于诱导表达系统的实验，用于控制基因的时空表达。在癌症研究中，可利用该稳转株，通过红色荧光直观地观察细胞在体内外的生长、迁移、侵袭等行为，以及研究相关基因对胰腺腺癌细胞生物学特性的影响等。

四、培养与保存

Panc 03.27 - RFP - Puro 稳转株的培养条件与原始 Panc 03.27 细胞系类似，但需在培养基中添加适量嘌呤霉素以维持抗性筛选压力。推荐使用 RPMI - 1640 基础培养基，添加 10% 胎牛血清、2mM L - 谷氨酰胺以及合适浓度（需摸索确定，一般在 0.5 - 2µg/ml）的嘌呤霉素作为完整生长培养基。细胞培养时，应将细胞置于 37℃、5% CO₂的培养箱中，当细胞密度达到 80% - 90% 融合时，按照 1:3 至 1:4 的比例进行传代。在传代过程中，需注意轻柔操作，避免细胞损伤。对于细胞冻存，冻存液可采用 90% 完整生长培养基加上 10% DMSO 。将细胞收集后，以合适密度悬浮于冻存液中，置于冻存管内，按照程序降温的方式，先放入 - 80℃冰箱过夜，随后转移至液氮中长期保存。复苏细胞时，从液氮中取出冻存管，迅速放入 37℃水浴锅中快速解冻，待细胞完全解冻后，转移至含有预热培养基的离心管中，低速离心去除冻存液，再用新鲜培养基重悬细胞并接种至培养皿中进行培养。

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