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Nthyori3-1-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/22 8:33:24
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详细内容
Nthyori3-1-GFP-Puro稳转株
英文名称 | Nthyori3-1-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H2088 |
中文名称 | GFP 标记的 Nthyori3-1 稳转株 |
Lot number | Nthyori3-1-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 10％ FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
构建流程（示例）
载体构建
构建含 GFP 基因 和 Puro 抗性基因 的表达载体（如质粒），通常通过分子克隆技术将目的基因插入载体多克隆位点。
载体需包含启动子（如 CMV 启动子）以驱动基因表达。
细胞转染
使用脂质体转染、电穿孔等方法将载体导入 Nthyori3-1 细胞。
外源基因随机整合到细胞基因组中。
嘌呤霉素筛选
转染后 48⁻⁷2 小时，加入嘌呤霉素（浓度需预实验优化）培养，未成功整合抗性基因的细胞死亡，存活细胞为初步筛选的稳转株。
单克隆化与鉴定
通过有限稀释法或流式细胞分选获得单克隆细胞，确保每个细胞株源自单个细胞。
鉴定方法：
荧光显微镜观察 GFP 表达（绿色荧光）。
Western blot 检测 GFP 蛋白水平。
基因组 PCR 验证外源基因整合。
应用场景
细胞示踪与成像
利用 GFP 荧光特性，追踪细胞在体内外的迁移、分化或相互作用（如共培养实验）。
适用于活细胞成像、组织切片荧光染色等。
药物筛选与机制研究
结合 Puro 筛选，可构建携带其他功能基因（如癌基因、抑癌基因）的稳转株，用于药物敏感性分析或信号通路研究。
例：通过 GFP 标记观察药物处理后细胞形态变化，同时利用 Puro 抗性维持基因稳定表达。
细胞功能研究
分析 GFP 融合蛋白的亚细胞定位（如定位于细胞核、细胞质或细胞膜），推测蛋白功能。
结合流式细胞术，分选高表达 GFP 的细胞亚群，用于单细胞测序或功能异质性研究。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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