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EMT6-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:08:17
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详细内容
EMT6-GFP-Puro稳转株
英文名称 | EMT6-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-M1191 |
中文名称 | GFP 标记的 EMT6 稳转株 |
Lot number | EMT6-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 10％ FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
EMT6-GFP-Puro 稳转株概述
EMT6 细胞是源自小鼠的乳腺癌细胞系，具有高侵袭性和转移性，常用于肿瘤生物学、药物筛选等研究。**GFP（绿色荧光蛋白）** 作为报告基因，可通过荧光显微镜直观观察细胞状态或示踪细胞行为。**Puro（嘌呤霉素）** 是一种抗生素，用于筛选成功转入目标基因的稳转细胞株（含 Puro 抗性基因的质粒转染细胞后，未成功转染的细胞会被 Puro 杀死，存活细胞即为稳转株）。
核心特性
特性 详情
细胞来源 小鼠乳腺癌，上皮样形态，贴壁生长。
标记基因 稳定表达 GFP，荧光激发波长约 488 nm，发射波长约 507 nm，可通过流式细胞术分选。
筛选标记 携带 Puro 抗性基因，需用 Puro（通常浓度 0.5–2 µg/mL）维持筛选压力。
应用场景 肿瘤迁移 / 侵袭研究、体内成像（如小鼠移植瘤模型）、药物靶向性验证等。
构建流程（简要）
载体构建：将 GFP 基因与 Puro 抗性基因插入质粒载体（如 pLVX 系列慢病毒载体）。
细胞转染：通过慢病毒感染或脂质体转染将载体导入 EMT6 细胞。
筛选与克隆化：用 Puro 处理细胞 2–3 周，杀死未转染细胞；通过有限稀释法或流式分选获得单细胞克隆。
鉴定：
荧光显微镜检测 GFP 表达均一性。
Western blot 验证 GFP 蛋白水平。
功能验证（如增殖、侵袭能力是否受标记影响）。
培养与维护要点
培养基：常用 DMEM/F12 或 RPMI 1640，含 10% 胎牛血清（FBS），1% 双抗（青霉素 / 链霉素）。
Puro 维持浓度：根据细胞状态调整，通常为 0.5 µg/mL（避免长期高浓度导致细胞毒性）。
传代注意：
避免过度汇合（>80%），以防细胞老化或荧光表达减弱。
传代时可短暂去除 Puro，待细胞贴壁后再添加（减少对细胞的应激）。
冻存与复苏：
冻存液：90% FBS + 10% DMSO，建议每管含 5×106–1×107 个细胞。
复苏后尽快加入 Puro（24 小时内），确保稳转株优势生长。
应用案例
体内肿瘤成像：将 EMT6-GFP-Puro 细胞接种于裸鼠乳腺脂肪垫，通过活体荧光成像监测肿瘤生长和转移（如肺、淋巴结转移灶）。
药物靶向效率验证：用 GFP 标记肿瘤细胞，结合荧光探针或纳米药物，通过共聚焦显微镜观察药物与肿瘤细胞的结合效率。
细胞共培养研究：与免疫细胞（如 T 细胞）共培养，通过 GFP 荧光区分肿瘤细胞与免疫细胞，分析免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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