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GL261-GFP-Puro稳转株
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详细内容
GL261-GFP-Puro稳转株
英文名称 | GL261-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-M1201 |
中文名称 | GFP 标记的 GL261 稳转株 |
Lot number | GL261-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 成纤维细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | (1)构建目的基因过表达慢病毒重组质粒,并包装慢病毒; (2)慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞; (3)用最佳浓度药物对细胞株进行筛选,获得混合稳转株; (4)稳转株质检(COA)。 |
完全培养基 | DMEM-H + 10% FBS + 1% P/S(选择添加) |
培养条件 | (1) 气相:95%空气,5% CO2;(2) 温度:37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |

GL261-GFP-Puro 稳转株概述
GL261 细胞是小鼠胶质母细胞瘤(glioblastoma)来源的细胞系,常用于神经系统肿瘤研究。**GFP(绿色荧光蛋白)** 作为报告基因,可通过荧光显微镜直接观察细胞表达情况,便于追踪细胞行为或筛选阳性克隆。**Puro(嘌呤霉素)** 是一种抗生素,用于稳转株的筛选 —— 通过质粒转染将携带 GFP 基因和嘌呤霉素抗性基因的载体导入细胞后,未成功整合载体的细胞会被嘌呤霉素杀死,存活细胞即为稳定表达 GFP 的稳转株(GL261-GFP-Puro)。
核心特性与应用
1. 核心特性
细胞来源:C57BL/6 小鼠胶质母细胞瘤,贴壁生长,具有恶性增殖和侵袭特性。
标记基因:
GFP:激发波长~488 nm,发射波长~509 nm,荧光强度高,适合活体成像、流式细胞术等。
Puro 抗性:通过嘌呤霉素筛选维持稳转状态,需在培养基中添加适量嘌呤霉素(通常 0.5~2 µg/mL,需预实验优化)。
培养条件:
培养基:DMEM 高糖培养基 + 10% 胎牛血清(FBS)+1% 双抗(青霉素 / 链霉素)。
环境:37℃、5% CO₂,贴壁培养时需定期消化传代(如 0.25% 胰酶)。
2. 主要应用场景
肿瘤研究:
体内成像:通过尾静脉或原位注射至小鼠脑内,利用 GFP 荧光追踪肿瘤生长、转移及药物分布(如荧光显微镜、小动物活体成像系统)。
体外功能研究:筛选 GFP 阳性细胞,用于细胞增殖、迁移、侵袭等实验(如 Transwell、划痕实验)。
基因编辑与载体验证:
作为模型细胞验证病毒载体(如慢病毒、腺相关病毒)的感染效率,或用于 CRISPR-Cas9 等基因编辑系统的稳转株构建。
药物筛选:
通过荧光信号强度或细胞存活率(结合 MTT、CCK-8 法)评估药物对 GFP 标记细胞的抑制效果。
操作注意事项
1. 稳转株维护
嘌呤霉素浓度:长期培养需维持筛选压力,避免抗性基因丢失。建议定期(如每 2~3 代)用含嘌呤霉素的培养基处理细胞,同时设置不含药物的对照组观察细胞状态。
传代密度:避免过度汇合导致细胞老化,建议传代密度保持在 50%~70%。
冻存与复苏:
冻存液:90% FBS+10% DMSO,可添加 10% 甘油增强冻存效果。
复苏时需快速融化,并尽快更换新鲜培养基以减少 DMSO 毒性。
2. 荧光检测优化
避免光漂白:GFP 长时间暴露于激发光下易发生光漂白,成像时需控制曝光时间,或使用防淬灭封片剂(如 ProLong Gold)。
背景干扰:某些培养基成分(如酚红)可能产生自发荧光,建议使用无酚红培养基或设置阴性对照(未转染 GFP 的 GL261 细胞)。
3. 体内实验注意事项
免疫相容性:GL261 细胞来源于 C57BL/6 小鼠,建议使用同品系免疫健全小鼠(如 C57BL/6J)进行原位移植,避免免疫排斥影响实验结果。
成像时间点:GFP 信号在移植后 3~7 天即可检测,需根据实验目的(如肿瘤生长动力学)设定成像周期。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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