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BHK-21-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:08:17
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详细内容
BHK-21-GFP-Puro稳转株
产品名称 | BHK-21-GFP-Puro 稳转株 |
产品货号 | XY-O1105 |
中文名称 | GFP 标记的 BHK-21 稳转株 |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | MEM + 10% FBS + 1％ NEAA |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
BHK-21-GFP-Puro 稳转株概述
BHK-21 细胞是仓鼠肾成纤维细胞系，具有贴壁生长、增殖能力强等特点，常用于病毒学研究、疫苗生产及基因表达系统。
**GFP（绿色荧光蛋白）** 作为报告基因，可通过荧光显微镜直观观察细胞转染或稳转情况，便于筛选和追踪目标细胞。
**Puro（嘌呤霉素）** 是一种抗生素，用于稳转株筛选 —— 仅成功整合抗性基因（如 Puro 抗性基因）的细胞可在含 Puro 的培养基中存活。
构建流程
载体构建
将 GFP 基因与 Puro 抗性基因插入同一质粒载体，形成重组质粒（如 pEGFP-Puro）。
载体需包含真核生物表达所需的启动子（如 CMV 启动子）和终止子等元件。
细胞转染
通过脂质体转染、电穿孔等方法将重组质粒导入 BHK-21 细胞。
非稳转细胞中，外源基因瞬时表达；稳转细胞需通过筛选获得。
嘌呤霉素筛选
转染后 48⁻⁷2 小时，向培养基中添加 Puro（浓度需预实验优化，通常为 0.5-2 µg/mL）。
未整合抗性基因的细胞逐渐死亡，存活细胞即为初步筛选的稳转株。
单克隆化与鉴定
通过有限稀释法或流式细胞术筛选单克隆细胞，确保基因稳定遗传。
鉴定方法：
荧光显微镜观察 GFP 表达（绿色荧光）。
Western blot 检测 GFP 蛋白水平。
基因组 PCR 验证外源基因整合。
应用场景
基因表达研究
利用 GFP 荧光特性，实时监测目的基因在 BHK-21 细胞中的定位与动态表达。
结合荧光共振能量转移（FRET）等技术，研究蛋白互作。
病毒包装与滴度测定
BHK-21 细胞常用于慢病毒、腺病毒等载体的包装，GFP 可作为标记基因评估病毒感染效率。
药物筛选与细胞示踪
在抗肿瘤药物研究中，通过 GFP 荧光强度变化反映细胞活性或凋亡情况。
体内实验中，注射稳转株细胞后可通过荧光成像追踪肿瘤生长或转移。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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