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ST2-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:08:17
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详细内容
ST2-GFP-Puro稳转株
英文名称 | ST2-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-M1140 |
中文名称 | GFP 标记的 ST2 稳转株 |
Lot number | ST2-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 成纤维细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 10％ FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
一、基本概念
核心组件
ST2 细胞：通常指小鼠骨髓基质细胞系（如 ST2 细胞株），具有支持造血干细胞生长、分泌细胞因子等特性，常用于免疫、炎症或干细胞研究。
GFP（绿色荧光蛋白）：作为报告基因，表达后可发出绿色荧光，便于通过荧光显微镜或流式细胞术直观追踪细胞或目标蛋白的位置及表达情况。
Puro（嘌呤霉素）：一种抗生素，用于稳转株筛选。携带 Puro 抗性基因的细胞可在含嘌呤霉素的培养基中存活，未成功转染的细胞则被淘汰。
稳转株定义
通过病毒感染（如慢病毒、逆转录病毒）或质粒转染等方式，将 GFP 基因和 Puro 抗性基因稳定整合到 ST2 细胞基因组中，使细胞持续表达 GFP 且对嘌呤霉素具有抗性，形成稳定遗传的细胞株。
二、构建原理与流程
载体设计
构建含 GFP 基因和 Puro 抗性基因的重组载体（如质粒或病毒载体），通常由启动子、GFP 编码序列、Puro 抗性基因及必要的调控元件组成。
示例载体结构：
plaintext
[启动子] → [GFP基因] → [IRES/2A序列] → [Puro抗性基因] → [终止子]
（IRES 或 2A 序列允许同一 mRNA 共表达 GFP 和抗性蛋白）
转染与筛选
转染：通过慢病毒感染（适用于难转染细胞）或化学转染（如脂质体）将载体导入 ST2 细胞。
筛选：转染后培养细胞，加入嘌呤霉素（浓度需预先优化），未整合抗性基因的细胞死亡，存活细胞即为稳定表达 GFP 的单克隆或混合稳转株。
验证与扩增
通过荧光显微镜观察 GFP 表达，流式细胞术检测荧光强度及纯度，Western blot 验证 GFP 蛋白水平。
单克隆稳转株需通过有限稀释法或单细胞分选获取，确保遗传背景一致。
三、应用场景
细胞追踪与成像
在活体或体外实验中，利用 GFP 荧光追踪 ST2 细胞的迁移、分化或与其他细胞的相互作用（如免疫细胞共培养）。
示例：研究 ST2 细胞在炎症模型中的定位，或作为基质细胞支持造血干细胞的机制。
蛋白定位与功能研究
将 GFP 与目标蛋白融合表达，通过荧光共聚焦显微镜观察蛋白在细胞内的定位（如细胞质、细胞核或细胞膜）。
结合 RNA 干扰（shRNA）或 CRISPR-Cas9 技术，敲低 / 敲除特定基因后，通过 GFP 标记细胞并分析表型变化（如增殖、凋亡）。
药物筛选与毒性评估
利用稳转株构建高通量筛选模型，通过荧光强度变化反映药物对细胞活性或目标蛋白表达的影响。
嘌呤霉素抗性可作为共筛选标记，确保转染细胞在长期培养中的稳定性。
动物模型研究
将 ST2-GFP-Puro 稳转株移植到免疫缺陷小鼠（如 NOD/SCID 小鼠）中，通过活体荧光成像监测肿瘤生长、免疫重建或组织修复过程。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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