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MB-49-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:08:17
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详细内容
MB-49-GFP-Puro稳转株
英文名称 | MB-49-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-M1200 |
中文名称 | GFP 标记的 MB-49 稳转株 |
Lot number | MB-49-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | DMEM-H + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
MB-49-GFP-Puro 稳转株概述
MB-49 是一种源自小鼠膀胱癌细胞的细胞系，常用于泌尿系统肿瘤研究。GFP（绿色荧光蛋白）是一种常用的报告基因，用于标记细胞以观察其行为或定位。Puro 指嘌呤霉素（Puromycin），是一种抗生素，常用于筛选成功转染外源基因的稳转细胞株。
核心特征
GFP 标记：
细胞稳定表达 GFP，可通过荧光显微镜直接观察细胞形态、分布或迁移，适用于活体成像、细胞追踪等实验。
优势：无需额外添加底物，荧光信号稳定，对细胞毒性低。
嘌呤霉素抗性筛选：
构建稳转株时，通过质粒共转染 GFP 基因和嘌呤霉素抗性基因（如 puroR），未成功整合外源基因的细胞会被嘌呤霉素杀死，确保存活细胞均为稳定转染株。
应用场景：
肿瘤研究：分析 MB-49 细胞的增殖、侵袭、转移等特性，GFP 标记可用于体内成瘤实验（如小鼠移植瘤模型）。
药物筛选：结合荧光强度变化或细胞存活情况，评估药物对肿瘤细胞的作用。
基因功能研究：通过 GFP 标记追踪特定基因（如与肿瘤微环境相关基因）的表达动态。
构建流程（简要）
载体构建：将 GFP 基因与嘌呤霉素抗性基因插入表达载体（如慢病毒载体或质粒）。
细胞转染：通过脂质体转染、电穿孔或病毒感染（如慢病毒）将载体导入 MB-49 细胞。
筛选与扩增：用嘌呤霉素（通常浓度为 1-5 µg/mL，需预实验优化）处理细胞，存活克隆经有限稀释法单克隆化，扩大培养后验证 GFP 表达稳定性。
鉴定：
荧光显微镜观察 GFP 阳性率（通常需＞95%）。
Western blot 检测 GFP 蛋白表达水平。
传代培养验证稳定性（如连续培养 10 代以上荧光强度无显著下降）。
注意事项
嘌呤霉素浓度优化：不同细胞系对药物敏感性不同，需设置浓度梯度（如 0、0.5、1、2 µg/mL）确定最低致死浓度（MDC）。
荧光干扰：GFP 激发波长为 488 nm，需避免与其他荧光染料（如 RFP）的光谱重叠，实验设计时需匹配荧光显微镜滤光片。
生物安全性：若使用病毒载体构建稳转株，需在生物安全柜中操作，并遵循实验室废弃物处理规范。
常见问题与解决方案
问题 可能原因 解决方案
荧光信号弱或丢失 细胞传代次数过多，质粒丢失 重新筛选单克隆，或使用病毒载体（整合至基因组）
嘌呤霉素筛选无存活细胞 药物浓度过高或转染效率过低 降低药物浓度，优化转染条件（如增加载体量）
非特异性荧光背景 培养基或血清污染荧光物质 更换无荧光添加剂的培养基，使用活性炭处理血清
延伸应用
体内成像：将 MB-49-GFP-Puro 细胞接种至免疫缺陷小鼠（如裸鼠），通过活体荧光成像系统监测肿瘤生长和转移。
共定位研究：结合其他荧光标记蛋白（如 mCherry 标记的细胞器蛋白），分析目标分子与 GFP 标记细胞的空间关系。
流式细胞术：利用 GFP 荧光强度分选高表达细胞亚群，用于单细胞测序或功能异质性研究。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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