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BHK-21-RFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:08:17
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详细内容
BHK-21-RFP-Puro稳转株
英文名称 | BHK-21-RFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-O1104 |
中文名称 | RFP 标记的 BHK-21 稳转株 |
Lot number | BHK-21-10A2P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | MEM + 10% FBS + 1％ NEAA + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
一、基本概念
BHK-21 细胞：
是一种源自叙利亚仓鼠肾细胞的贴壁依赖性成纤维细胞系，具有生长迅速、易于培养等特点，在病毒学研究、疫苗生产及基因表达等领域应用广泛。
RFP：
即红色荧光蛋白（Red Fluorescent Protein），作为报告基因，可在细胞中稳定表达并发出红色荧光，便于通过荧光显微镜等工具对细胞进行可视化追踪、筛选及观察细胞内的基因表达和蛋白质定位等情况。
Puro：
通常指嘌呤霉素（Puromycin），是一种抗生素，在细胞稳转株构建中常用作筛选标记。含有 Puro 抗性基因的细胞在含有嘌呤霉素的培养基中能够存活，而不含该抗性基因的细胞则会被杀死，从而实现对稳转细胞的筛选。
稳转株：
指通过基因转染等技术将外源基因稳定整合到细胞基因组中，并能在细胞分裂过程中稳定遗传给子代细胞的细胞株。BHK-21-RFP-Puro 稳转株即通过特定方法将携带 RFP 基因和 Puro 抗性基因的载体导入 BHK-21 细胞后，经筛选获得的稳定表达 RFP 且具有嘌呤霉素抗性的细胞株。
二、构建流程
载体构建：
构建包含 RFP 基因和 Puro 抗性基因的表达载体，通常还会含有其他必要的调控元件（如启动子、终止子等），以确保外源基因在细胞中能够正确表达。
细胞转染：
使用合适的转染方法（如脂质体转染、电穿孔转染等）将构建好的载体导入 BHK-21 细胞中，使外源基因进入细胞。
筛选与克隆化：
转染后的细胞在含有嘌呤霉素的培养基中进行培养，未成功导入载体（即不含 Puro 抗性基因）的细胞会被杀死，而成功导入载体的细胞能够存活下来。经过一段时间的筛选，存活的细胞可能形成单细胞克隆，通过有限稀释法等克隆化方法对这些单细胞克隆进行分离和培养，获得遗传背景均一的稳转株细胞。
鉴定：
对筛选获得的稳转株细胞进行鉴定，包括通过荧光显微镜观察细胞是否稳定表达 RFP 荧光，采用分子生物学方法（如 PCR、Western blot 等）检测 RFP 基因的表达情况及 Puro 抗性基因的存在等，以确保稳转株的质量和稳定性。
三、应用领域
细胞生物学研究：
利用 RFP 的荧光特性，可实时观察 BHK-21 细胞的生长、分裂、迁移等动态过程，研究细胞的生理和病理机制。例如，在细胞凋亡研究中，通过观察 RFP 标记的细胞形态变化，了解凋亡过程的进展。
用于研究细胞内蛋白质的定位和相互作用，将目标蛋白质与 RFP 融合表达，通过荧光显微镜观察融合蛋白在细胞内的分布情况，进而推测目标蛋白质的功能和作用机制。
病毒学研究：
BHK-21 细胞常用于多种病毒的培养和研究，如狂犬病病毒、水疱性口炎病毒等。RFP-Puro 稳转株可作为病毒感染模型，通过荧光标记追踪病毒在细胞内的感染过程，研究病毒的入侵机制、复制周期及与宿主细胞的相互作用等。
在疫苗研发中，可利用该稳转株细胞进行病毒疫苗的生产和滴度测定，通过荧光观察或其他检测方法评估疫苗的效力和安全性。
基因表达与调控研究：
作为外源基因表达的宿主细胞，用于研究目的基因在 BHK-21 细胞中的表达水平、调控机制及功能。通过将目的基因与 RFP 基因共表达，可方便地筛选出高表达目的基因的细胞克隆，进一步研究目的基因的生物学功能。
药物筛选与毒性检测：
在药物研发过程中，可利用该稳转株细胞筛选具有特定作用的药物。例如，观察药物对细胞形态、荧光强度及细胞增殖等方面的影响，评估药物的药效和毒性。
通过检测药物处理后细胞中 RFP 的表达情况或细胞的存活状态，可快速筛选出对目标细胞具有潜在作用的药物化合物。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
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