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EL4-BSD+ffluc稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:08:17
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详细内容
EL4-BSD+ffluc稳转株
英文名称 | EL4-BSD+ffluc polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-M1204 |
中文名称 | ffluc 标记的 EL4 稳转株 |
Lot number | EL4-31B2P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 淋巴母细胞样 |
生长特性 | 悬浮生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 10% FBS + 0.05mM β-巯基乙醇+ IL2 (1000x) + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
一、基本概念
1. EL4 细胞
来源：EL4 细胞是源自 C57BL/6 小鼠的 T 淋巴瘤细胞系，常用于免疫学、肿瘤学研究（如 T 细胞功能、细胞毒性实验等）。
特点：贴壁或悬浮生长（因培养条件而异），具有典型的 T 细胞表面标志物（如 CD3、CD4 等），对刺激剂（如 ConA）敏感。
2. BSD（Blasticidin）
作用：BSD 是一种抗生素，通过抑制蛋白质合成杀死细胞，常用于真核细胞的稳转株筛选（携带 BSD 抗性基因的细胞可存活）。
3. ffluc（萤火虫荧光素酶）
功能：ffluc 是一种报告基因，其表达产物可催化荧光素发光，通过检测荧光强度定量细胞数量、活性或体内分布（如活体成像）。
4. 稳转株（Stable Cell Line）
定义：通过基因工程手段将外源基因（如 ffluc）稳定整合到细胞基因组中，使目的基因持续表达的细胞株，可长期传代且表达稳定。
二、EL4-BSD+ffluc 稳转株的构建流程
1. 载体构建
质粒设计：构建含以下元件的重组质粒：
ffluc 基因：用于荧光标记。
BSD 抗性基因：用于稳转株筛选。
启动子（如 CMV）：驱动基因表达。
筛选标记（如氨苄青霉素抗性，用于细菌筛选）。
2. 细胞转染
方法：常用脂质体转染（如 Lipofectamine）或电穿孔法，将重组质粒导入 EL4 细胞。
原理：通过物理或化学手段使细胞膜形成微孔，允许质粒 DNA 进入细胞。
3. 筛选与单克隆化
BSD 筛选：转染后 48⁻⁷2 小时，加入 BSD（如 10-20 µg/mL）培养，未成功整合质粒的细胞死亡，存活细胞为初步稳转株。
有限稀释法：将初步稳转株稀释至单细胞浓度，接种于 96 孔板，培养后筛选单克隆细胞（确保基因表达均一性）。
4. 鉴定与扩增
荧光检测：通过流式细胞术（FACS）或荧光显微镜检测 ffluc 表达水平，筛选高表达克隆。
稳定性验证：连续传代 10 代以上，检测 ffluc 表达是否稳定。
扩大培养：将阳性克隆扩增，冻存于液氮中备用。
三、应用场景
1. 体内肿瘤研究
活体成像：将稳转株注射至小鼠体内（如皮下、腹腔），通过生物发光成像（BLI）实时监测肿瘤生长、转移及药物疗效。
示例：研究免疫治疗（如 PD-1 抑制剂）对 EL4 淋巴瘤的抑制作用，通过荧光强度量化肿瘤体积变化。
2. 体外细胞功能研究
细胞增殖检测：ffluc 活性与细胞数量呈正相关，通过荧光强度快速评估细胞增殖能力（如药物毒性实验）。
信号通路研究：结合报告基因系统（如 Luciferase reporter assay），分析转录因子活性或通路激活情况。
3. 免疫学研究
T 细胞功能分析：EL4 作为 T 淋巴瘤细胞，可用于研究 T 细胞活化、凋亡或与其他免疫细胞的相互作用（如与 DC 细胞共培养）。
抗体药效评价：通过检测 ffluc 标记的 EL4 细胞死亡情况，评估抗体介导的细胞毒性（如 ADCC 效应）。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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