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EL4-GFP-Puro+ffluc稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:08:17
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详细内容
EL4-GFP-Puro+ffluc稳转株
英文名称 | EL4-GFP-Puro+ffluc polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-M1205 |
中文名称 | ffluc 和 GFP 双标的 EL4 稳转株 |
Lot number | EL4-24D1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 淋巴母细胞样 |
生长特性 | 悬浮生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 10% FBS + 0.05mM β-巯基乙醇+ IL2 (1000x) + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
关键元件功能
GFP（绿色荧光蛋白）
标记作用：作为报告基因，通过荧光显微镜或流式细胞术可直接观察细胞中外源基因的表达情况，便于筛选和追踪阳性细胞。
应用场景：细胞定位研究、细胞示踪（如体内移植后的分布观察）、转染效率评估等。
Puro（嘌呤霉素抗性基因）
筛选工具：用于稳转株的构建过程中。转染后，加入嘌呤霉素进行筛选，只有成功整合抗性基因的细胞才能存活，从而获得纯合的稳定表达细胞株。
ffluc（萤火虫荧光素酶基因）
检测功能：荧光素酶在底物（如荧光素）存在下可催化发光反应，通过生物发光成像（BLI）技术定量检测细胞数量、增殖能力或体内肿瘤生长情况（如荷瘤小鼠模型）。
优势：灵敏度高，可实现非侵入性实时监测，适用于活体动物实验。
构建流程与技术要点
载体构建
将 GFP、Puro 抗性基因和 ffluc 基因克隆到同一质粒载体中，通常使用病毒载体（如慢病毒、逆转录病毒）提高转染效率和整合稳定性。
转染与筛选
通过病毒感染或电穿孔等方法将载体导入 EL4 细胞。
加入嘌呤霉素进行药物筛选，存活细胞即为成功整合外源基因的单克隆或多克隆稳转株。
鉴定与验证
荧光检测：通过流式细胞术检测 GFP 阳性率，确保细胞均一表达荧光标记。
酶活性测定：利用荧光素酶报告基因检测系统（如 Promega 的 Luciferase Assay）验证 ffluc 的功能性表达。
稳定性评估：传代培养若干代后，检测荧光强度和酶活性是否维持稳定，排除基因丢失或沉默的细胞。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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