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EL4-mCherry-BSD+ffluc稳转株
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详细内容
EL4-mCherry-BSD+ffluc稳转株
英文名称 | EL4-mCherry-BSD+ffluc polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-M1206 |
中文名称 | mCherry 和 ffluc 双标的 EL4 稳转株 |
Lot number | EL4-31B5P+23J4P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T12.5细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 淋巴母细胞样 |
生长特性 | 悬浮生长 |
细胞株 构建流程 | (1)构建目的基因过表达慢病毒重组质粒,并包装慢病毒; (2)慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞; (3)用最佳浓度药物对细胞株进行筛选,获得混合稳转株; (4)稳转株质检(COA)。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 10% FBS + 0.05mM β-巯基乙醇+ IL2 (1000x) + 1% P/S(选择添加) |
培养条件 | (1) 气相:95%空气,5% CO2;(2) 温度:37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |

EL4-mCherry-BSD+ffluc 稳转株概述
EL4 细胞是源自小鼠的 T 淋巴瘤细胞系,常用于免疫学、肿瘤学等研究。稳转株(稳定转染细胞株)是通过基因工程技术将外源基因稳定整合到细胞基因组中,使其能够长期表达特定蛋白的细胞群体。
关键元件说明:
mCherry
是一种红色荧光蛋白(RFP),作为报告基因用于可视化追踪细胞,例如在活体成像中观察肿瘤细胞分布或细胞迁移。
激发波长约 587 nm,发射波长约 610 nm,荧光信号强且稳定性高。
BSD(Blasticidin 抗性基因)
提供杀稻瘟菌素(Blasticidin)抗性,用于稳转株筛选。转染后通过添加 BSD 抗生素,未成功整合外源基因的细胞会被杀死,存活细胞即为稳定转染株。
ffluc(萤火虫荧光素酶)
编码萤火虫荧光素酶,可催化荧光素氧化并产生生物发光。常用于体内成像(如小动物活体成像),定量检测细胞数量、肿瘤生长或药物疗效。
需外源性添加荧光素底物(如 D - 荧光素)以检测信号。
应用场景:
肿瘤研究
体内成像:通过 mCherry 荧光(可见光)和 ffluc 生物发光(近红外光)双重标记,实时监测肿瘤细胞在小鼠体内的生长、转移及药物响应。
示例:将稳转株注射至免疫缺陷小鼠,利用活体成像系统观察肿瘤体积变化,或通过 BSD 抗性筛选耐药细胞亚群。
免疫机制研究
追踪 T 细胞行为:EL4 作为 T 淋巴瘤细胞,可用于研究免疫细胞与肿瘤微环境的相互作用,例如 mCherry 标记细胞迁移路径,ffluc 定量细胞增殖。
药物筛选
高通量筛选:利用 ffluc 的发光强度反映细胞活性,快速评估药物对肿瘤细胞的杀伤效果(如 IC50 测定)。
构建流程(简要):
载体构建:将 mCherry、BSD 和 ffluc 基因克隆至同一质粒载体(如慢病毒或逆转录病毒载体),确保各元件独立表达(如使用不同启动子)。
细胞转染:通过病毒感染(常用慢病毒)或电穿孔法将载体导入 EL4 细胞。
筛选与鉴定:
加入 BSD 抗生素培养 2 - 3 周,筛选稳定表达抗性基因的细胞克隆。
流式细胞术(FACS)分选高表达 mCherry 的单克隆细胞。
荧光素酶活性检测(如 Promega 的 Steady - Glo® 试剂)验证 ffluc 功能。
稳定性验证:传代培养 20 代以上,检测荧光强度和发光活性是否维持稳定。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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