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Calu-1-Puro+ffluc稳转株
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详细内容
Calu-1-Puro+ffluc稳转株
英文名称 | Calu-1-Puro+ffluc polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H2311 |
中文名称 | ffluc 标记的 Calu-1 稳转株 |
Lot number | Calu-1-24D3P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | (1)构建目的基因过表达慢病毒重组质粒,并包装慢病毒; (2)慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞; (3)用最佳浓度药物对细胞株进行筛选,获得混合稳转株; (4)稳转株质检(COA)。 |
完全培养基 | McCOY's5A + 10% FBS + 1% P/S(选择添加) |
培养条件 | (1) 气相:95%空气,5% CO2;(2) 温度:37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |

关键元素解析:
Puro:通常指嘌呤霉素(Puromycin),是一种抗生素,常用于稳转株筛选。带有嘌呤霉素抗性基因的载体转染细胞后,未成功整合外源基因的细胞会被嘌呤霉素杀死,存活细胞即为稳定转染的阳性克隆。
ffluc:即萤火虫荧光素酶(Firefly Luciferase),是一种报告基因,其表达产物可催化荧光素发光,通过检测荧光强度定量分析基因表达水平或细胞活性。常用于体内成像(如肿瘤模型的生物发光成像)、药物筛选或基因调控研究。
构建流程与应用场景
构建流程:
载体构建:将 ffluc 基因与嘌呤霉素抗性基因(如 puroR)插入到合适的表达载体(如慢病毒载体、质粒载体)中,形成重组质粒。
细胞转染:通过脂质体转染、电穿孔或病毒感染(如慢病毒)将重组载体导入 Calu-1 细胞。
筛选与克隆化:使用嘌呤霉素培养基筛选存活细胞,经有限稀释法或流式细胞术(FACS)克隆化,获得单克隆稳转株。
鉴定与验证:通过 Western blot 检测 ffluc 蛋白表达,利用荧光素酶活性检测(如 Luciferase Assay)验证功能,确保稳定性和表达均一性。
应用场景:
肿瘤生物学研究:通过 ffluc 的生物发光成像,实时追踪 Calu-1 细胞在动物体内的生长、转移及药物响应(如构建肺癌转移模型)。
药物筛选:利用荧光素酶活性反映细胞活力,高通量筛选抗肿瘤药物或评估药物毒性。
基因调控机制研究:将 ffluc 与目的基因启动子连接,分析转录因子对基因表达的调控作用。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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