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Caco-2-Puro+ffluc2稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/22 8:33:24
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详细内容
Caco-2-Puro+ffluc2稳转株
英文名称 | Caco-2-Puro+ffluc polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H2292 |
中文名称 | ffluc 标记的 Caco-2 稳转株 |
Lot number | Caco-2-24D3P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | DMEM-H + 20％ FBS + 1％ NEAA + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
Caco-2-Puro+ffluc2 的关键要素：
筛选标记：Puro（嘌呤霉素）
用于筛选成功转染的细胞。含 Puro 抗性基因的载体转入细胞后，未成功整合外源基因的细胞会被嘌呤霉素杀死，存活细胞即为稳定转染株。
报告基因：ffluc2（荧光素酶）
ffluc2是萤火虫荧光素酶（Firefly Luciferase）的优化版本，具有更高的酶活性和稳定性。
应用场景：
体内外成像：通过荧光素底物发光，实时监测细胞在动物模型中的分布、增殖或药物响应（如肿瘤转移研究）。
定量分析：通过检测荧光强度，量化细胞数量、基因表达水平或药物处理后的细胞活性变化。
构建流程与技术要点
1. 载体设计
构建含ffluc2 基因和Puro 抗性基因的重组质粒（如慢病毒载体、质粒载体），确保两者共表达。
载体需包含：
启动子（如 CMV 启动子，驱动 ffluc2 持续表达）；
多克隆位点（便于插入其他目的基因，如需同时研究转运蛋白与荧光素酶的关联）。
2. 细胞转染
方法：常用慢病毒感染（适用于难转染细胞）或脂质体转染。
关键步骤：
病毒包装：在 293T 细胞中包装含目的基因的慢病毒颗粒；
感染 Caco-2 细胞：通过梯度稀释确定最佳感染复数（MOI），确保高效转染且细胞毒性最低。
3. 筛选与鉴定
嘌呤霉素筛选：转染后 48⁻⁷2 小时加入 Puro（浓度需预实验优化，通常为 0.5-2 µg/mL），持续培养 2-3 周，直至未转染细胞全部死亡。
单克隆化：通过有限稀释法或流式细胞分选（FACS）获得单细胞克隆，确保稳转株遗传背景均一。
鉴定方法：
荧光素酶活性检测：裂解细胞后加入荧光素底物，用酶标仪检测发光强度；
Western blot：验证 ffluc2 蛋白表达；
基因组 PCR：确认外源基因整合到细胞基因组中。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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