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DC2.4-GFP-Puro+ffluc稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:08:04
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详细内容
DC2.4-GFP-Puro+ffluc稳转株
产品名称 | DC2.4-GFP-Puro+ffluc 稳转株 |
产品货号 | XY-M1264 |
中文名称 | ffluc 和 GFP 双标的 DC2.4 稳转株 |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 10％ FBS + 0.05 mM β-巯基乙醇 + NEAA (100×) |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
DC2.4-GFP-Puro+ffluc 稳转株概述
DC2.4 细胞是一种源自小鼠的树突状细胞（Dendritic Cell, DC）系，常用于免疫相关研究（如抗原呈递、免疫应答机制等）。稳转株（Stable Cell Line）是指通过基因工程手段将外源基因稳定整合到细胞基因组中，使其能够长期稳定表达目标蛋白的细胞株。
关键组件解析
GFP（绿色荧光蛋白）
功能：作为报告基因，用于实时监测细胞状态、定位目标蛋白或追踪细胞在体内外的分布（如通过荧光显微镜观察）。
应用场景：细胞分选（FACS）、转染效率验证、蛋白表达定位分析等。
Puro（嘌呤霉素抗性基因）
功能：作为筛选标记，用于稳转株构建过程中筛选成功整合外源基因的细胞。
机制：未转入 Puro 抗性基因的细胞会被嘌呤霉素杀死，存活细胞即为成功转染的稳转株。
ffluc（萤火虫荧光素酶）
功能：作为生物发光报告基因，通过荧光素酶催化底物（如荧光素）产生发光信号，可用于定量检测基因表达水平或细胞活性。
应用场景：体内成像（如小动物活体成像）、体外细胞增殖 / 凋亡分析、药物筛选等。
构建流程与技术要点
1. 载体构建
重组质粒：将 GFP、Puro 抗性基因和 ffluc 基因插入到合适的载体（如慢病毒载体、逆转录病毒载体）中，确保各基因的表达框正确（如启动子、终止子等调控元件）。
多顺反子设计：常通过 IRES（内部核糖体进入位点）或 2A 肽序列实现多个基因的共表达，确保 GFP、Puro、ffluc 在同一细胞中稳定表达。
2. 细胞转染与筛选
转染方法：
对于 DC2.4 细胞（通常为悬浮细胞），常用病毒感染（如慢病毒）提高转染效率，避免脂质体转染对细胞活性的影响。
筛选过程：
转染后加入嘌呤霉素进行压力筛选，未成功整合抗性基因的细胞逐渐死亡，存活细胞形成单克隆后扩大培养，获得稳转株。
3. 稳转株鉴定
荧光检测：通过荧光显微镜或流式细胞术（FACS）验证 GFP 的表达率（通常要求阳性率 > 95%）。
ffluc 活性检测：使用荧光素酶检测试剂盒（如 Luciferase Assay）定量分析细胞内 ffluc 的酶活性，确认报告基因功能正常。
基因组整合验证：通过 PCR 或测序技术检测外源基因是否稳定整合到 DC2.4 细胞的基因组中。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
热门标签：DC2.4-GFP-Puro+ffluc稳转株,ffluc,和,GFP,双标的,DC2.4,稳转株,DC2.4,稳转株
