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TM3-GFP-Puro+ffluc单克隆株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:08:04
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详细内容
TM3-GFP-Puro+ffluc单克隆株
产品名称 | TM3-ffluc2-GFP-Puro 单克隆细胞株 |
产品货号 | XY-M1253 |
中文名称 | ffluc2、GFP 双标的 TM3 单克隆细胞株 |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转细胞株； （4）采用无限稀释法筛选单克隆细胞株； （5）单克隆细胞株质检（COA）。 |
完全培养基 | DMEM / F12 (1 : 1) + 5% HS + 2.5% FBS |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
共享方式 | 公益性共享 |
基本概念
TM3 细胞：来源于小鼠睾丸间质细胞（Leydig cell），常用于内分泌研究、细胞信号传导等领域。
GFP（绿色荧光蛋白）：作为报告基因，使细胞表达绿色荧光，便于通过荧光显微镜或流式细胞术等观察和分选细胞。
Puro（嘌呤霉素）：抗生素抗性基因，用于筛选成功转染的细胞（含 Puro 抗性基因的细胞可在嘌呤霉素存在的培养基中存活）。
ffluc（萤火虫荧光素酶）：另一种报告基因，通过荧光素酶反应产生生物荧光，常用于活体成像、细胞增殖或体内追踪研究。
构建与筛选流程
载体构建：
将 GFP、Puro 抗性基因和 ffluc 基因插入到合适的质粒载体中，形成重组质粒（如慢病毒载体）。
载体需包含各基因的启动子（如 CMV 启动子）以确保基因表达。
细胞转染：
使用脂质体转染、电穿孔或病毒感染（如慢病毒）等方法，将重组质粒导入 TM3 细胞。
抗性筛选：
在培养基中添加嘌呤霉素，未成功转染的细胞死亡，存活细胞为稳定表达 Puro 抗性基因的单克隆株。
单克隆化：
通过有限稀释法或流式细胞分选（FACS）筛选单细胞克隆，确保每个克隆来源于单个细胞，遗传背景均一。
鉴定与验证：
荧光检测：通过荧光显微镜观察 GFP 表达（绿色荧光），确认 GFP 整合成功。
ffluc 活性检测：加入荧光素底物，通过 luminometer 检测荧光强度，验证 ffluc 功能活性。
遗传稳定性验证：传代培养后重复检测荧光表达和抗性，确保基因稳定遗传。
应用场景
细胞示踪与成像：
体外：利用 GFP 荧光标记观察细胞形态、迁移或分化过程。
体内：将细胞移植到小鼠模型中，通过 ffluc 荧光素酶活体成像技术追踪肿瘤生长、转移或药物分布。
药物筛选与毒性研究：
通过嘌呤霉素筛选稳定转染的细胞株，结合 GFP 或 ffluc 信号强度变化，评估药物对细胞增殖、凋亡的影响。
信号通路研究：
结合 GFP 标记的亚细胞结构（如细胞膜、细胞器），研究信号分子的定位与动态变化；利用 ffluc 报告基因检测特定通路的活性（如通过启动子驱动 ffluc 表达）。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
热门标签：TM3-GFP-Puro+ffluc单克隆株,ffluc2,GFP,双标的,TM3,单克隆细胞株,,TM3,单克隆细胞株
