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MC38-Puro+PDL1(h)稳转株
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详细内容
MC38-Puro+PDL1(h)稳转株
英文名称 | MC38-Puro+PDL1(h) polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-M1347 |
中文名称 | PDL1(h) 过表达 MC38 稳转株 |
Lot number | MC38-32D6P |
细胞规格 | 复苏细胞(T25细胞瓶)或1 × 106 细胞冻存细胞。 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | (1)构建目的基因过表达慢病毒重组质粒,并包装慢病毒; (2)慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞; (3)用最佳浓度药物对细胞株进行筛选,获得混合稳转株; (4)稳转株质检(COA)。 |
完全培养基 | DMEM-H + 10% FBS + 1% P/S(选择添加) |
培养条件 | (1) 气相:95%空气,5% CO2;(2) 温度:37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |

基本概念
MC38 细胞系:来源于 C57BL/6 小鼠的结肠腺癌细胞系,具有一定的肿瘤 igenicity 和免疫原性,常被用于肿瘤研究,特别是在肿瘤免疫治疗的相关实验中,是一种常用的小鼠同源肿瘤模型。
Puro:即嘌呤霉素(Puromycin),是一种抗生素。在细胞培养中,常用于筛选稳定转染了含有嘌呤霉素抗性基因载体的细胞。只有成功转染并整合了外源基因(同时带有嘌呤霉素抗性基因)的细胞,才能在含有嘌呤霉素的培养基中存活,从而实现稳定转染细胞株的筛选。
PDL1(h):指人源化的程序性死亡配体 1(Programmed Death Ligand 1)。PD-L1 是一种跨膜蛋白,在肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用,它可以与 T 细胞表面的 PD-1 受体结合,抑制 T 细胞的活化和增殖,从而使肿瘤细胞逃避机体免疫系统的攻击。MC38-Puro+PDL1 (h) 稳转株就是将人源的 PD-L1 基因导入 MC38 细胞中,使其稳定表达人源 PD-L1 蛋白的细胞株。
构建方法
载体构建:首先需要构建含有目的基因(人源 PD-L1 基因)和筛选标记基因(如嘌呤霉素抗性基因)的表达载体。通常会选择合适的质粒载体,将人源 PD-L1 基因的编码序列克隆到载体中,同时确保载体上含有有效的启动子、增强子等调控元件,以保证目的基因在细胞内能够高效表达。
细胞转染:采用适当的转染方法将构建好的表达载体导入 MC38 细胞中,常用的转染方法有脂质体转染法、电穿孔法、慢病毒感染法等。其中,慢病毒感染法具有感染效率高、可稳定整合到宿主细胞基因组等优点,在构建稳转株中较为常用。将慢病毒载体与 MC38 细胞共培养,使病毒能够感染细胞并将携带的目的基因整合到细胞染色体上。
筛选与鉴定:转染后的细胞在含有嘌呤霉素的培养基中进行筛选培养,只有成功转染并表达嘌呤霉素抗性基因的细胞才能存活下来。经过一段时间的筛选,得到稳定表达人源 PD-L1 蛋白的细胞株。随后,还需要通过 Western blotting、免疫荧光染色、流式细胞术等技术对稳转株进行鉴定,检测人源 PD-L1 蛋白的表达水平和定位,以确保构建的稳转株符合实验要求。
应用领域
肿瘤免疫治疗研究:可用于研究人源 PD-L1 与免疫细胞(如 T 细胞)之间的相互作用机制,以及评估针对 PD-L1 的免疫检查点抑制剂的药效。通过将 MC38-Puro+PDL1 (h) 稳转株接种到免疫健全的小鼠体内,建立肿瘤模型,然后给予不同的免疫治疗药物,观察肿瘤的生长情况、免疫细胞的浸润和活化状态等,为肿瘤免疫治疗的药物研发和治疗方案优化提供重要的实验依据。
药物筛选与评估:作为药物筛选的细胞模型,用于筛选能够靶向人源 PD-L1 或调节 PD-L1 相关信号通路的小分子化合物、抗体药物等。可以在体外利用该稳转株进行大规模的药物筛选,快速筛选出具有潜在抗肿瘤活性的药物,并进一步评估其药效和作用机制,为新药研发提供候选药物。
肿瘤微环境研究:有助于深入了解肿瘤细胞表达人源 PD-L1 对肿瘤微环境的影响,包括对肿瘤相关巨噬细胞、树突状细胞等免疫细胞的招募和功能调节,以及对肿瘤血管生成、细胞外基质重塑等方面的作用。通过研究 MC38-Puro+PDL1 (h) 稳转株在肿瘤微环境中的生物学行为,能够更好地揭示肿瘤免疫逃逸的机制,为开发针对肿瘤微环境的治疗策略提供理论支持。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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