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B16F10-Puro+OVA单克隆株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:08:04
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B16F10-Puro+OVA单克隆株
产品名称 | B16F10-Puro+OVA 单克隆株 |
产品货号 | XY-M1357 |
中文名称 | OVA 过表达 B16F10 单克隆株 |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）采用无限稀释法筛选单克隆株； （5）单克隆株质检（COA）。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
1. 背景与基本信息
B16F10 细胞：
是小鼠黑色素瘤细胞系，源自 C57BL/6 小鼠的皮肤黑色素瘤，常用于肿瘤免疫、癌症研究等领域。
特点：高转移性、免疫原性相对较低，常作为模型细胞用于评估抗肿瘤免疫反应（如疫苗、免疫疗法效果）。
Puro+OVA：
Puro：通常指嘌呤霉素（Puromycin），是一种抗生素，常用于基因工程中作为筛选标记（携带 Puro 抗性基因的细胞可在含嘌呤霉素的培养基中存活）。
OVA：卵清蛋白（Ovalbumin），是一种常用的模型抗原，常用于免疫学研究（如诱导特异性 T 细胞反应）。
单克隆株：
通过克隆化培养（如有限稀释法）获得的单一细胞来源的纯细胞群体，确保细胞遗传背景一致，实验结果重复性高。
2. 构建目的与应用
（1）构建目的
基因改造：
向 B16F10 细胞中导入表达 OVA 抗原 的基因，并通过 Puro 抗性基因 筛选成功转染的细胞，获得稳定表达 OVA 的单克隆株。
目的：使肿瘤细胞表达特定抗原（OVA），便于研究抗原特异性免疫反应（如 CD4+/CD8+ T 细胞对 OVA 的识别和攻击）。
（2）主要应用
肿瘤免疫研究：
作为 抗原呈递模型，用于评估疫苗诱导的 OVA 特异性 T 细胞应答。
研究免疫检查点抑制剂（如 PD-1/PD-L1 抗体）对表达 OVA 肿瘤细胞的杀伤效果。
免疫治疗开发：
测试过继性细胞疗法（如 CAR-T 细胞）对 OVA 阳性肿瘤的靶向能力。
疫苗研发：
验证 OVA 作为抗原成分的疫苗在体内的抗肿瘤效果（如预防性或治疗性疫苗）。
3. 实验操作要点
细胞转染与筛选：
使用质粒载体将 OVA 基因和 Puro 抗性基因共转染至 B16F10 细胞。
用嘌呤霉素培养基筛选存活细胞，通过有限稀释法获得单克隆株，确保每个克隆均稳定表达 OVA。
鉴定方法：
分子水平：PCR 检测 OVA 基因整合，qPCR 或 Western blot 验证 OVA 蛋白表达。
功能验证：通过 ELISPOT 或流式细胞术检测小鼠脾细胞 / 肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）对 OVA 肽段的特异性反应。
动物模型：
皮下接种至 C57BL/6 小鼠（同基因型），建立 OVA 阳性肿瘤模型，用于体内免疫实验。
对照组可使用未转染的 B16F10 细胞或转染空载体的细胞。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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