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CHO-K1-GFP-Puro+EGFR(h,FL)稳转株
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详细内容
CHO-K1-GFP-Puro+EGFR(h,FL)稳转株
英文名称 | CHO-K1-GFP-Puro+EGFR(h,FL) polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-O1116 |
中文名称 | EGFR 过表达 CHO-K1 稳转株 |
Lot number | CHO-K1-32B7P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | (1)构建目的基因过表达慢病毒重组质粒,并包装慢病毒; (2)慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞; (3)用最佳浓度药物对细胞株进行筛选,获得混合稳转株; (4)稳转株质检(COA)。 |
完全培养基 | F12K + 10% FBS + 1% P/S(选择添加) |
培养条件 | (1) 气相:95%空气,5% CO2;(2) 温度:37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |

细胞系背景:
以 CHO-K1 细胞为基础。CHO-K1 细胞是中国仓鼠卵巢细胞(CHO 细胞)的一种亚型,是一种常用的哺乳动物细胞系,具有高蛋白表达能力和易于规模化培养等特性,广泛应用于生物制药领域和基因功能研究等。
标记基因与抗性基因:
表达绿色荧光蛋白(GFP),这使得细胞在荧光显微镜下能够发出绿色荧光,便于通过荧光显微镜或流式细胞术等方法进行细胞的观察、筛选和追踪,可用于研究基因表达调控、蛋白定位及细胞示踪等实验。
具有嘌呤霉素(Puro)抗性基因。这意味着在培养该细胞株时,可以在培养基中添加嘌呤霉素来筛选和维持稳定转染的细胞,只有成功转入并稳定表达相关基因(包括嘌呤霉素抗性基因)的细胞才能在含有嘌呤霉素的培养基中存活,而未成功转染的细胞则会被淘汰。
目的基因:
表达人源表皮生长因子受体(EGFR)的全长(FL)形式,即 EGFR (h,FL)。EGFR 是一种重要的跨膜蛋白受体,在细胞增殖、分化、迁移等多种生物学过程中发挥着关键作用,也是许多癌症治疗药物的靶点。将 EGFR 全长基因稳定转染到 CHO-K1 细胞中,可用于研究 EGFR 的功能、信号传导途径以及筛选针对 EGFR 的药物等实验。
构建方法:
通常采用基因转染技术,如脂质体转染或病毒转染(如慢病毒转染)等方法,将包含 GFP 基因、Puro 抗性基因以及 EGFR (h,FL) 基因的表达载体导入 CHO-K1 细胞。然后通过在培养基中添加嘌呤霉素进行筛选,再经过单克隆培养等步骤,获得稳定表达这些基因的细胞株。
培养条件:
一般来说,CHO-K1 细胞的培养条件适用于该稳转株。通常在 37℃、5% CO₂的培养箱中,使用含有适当营养成分的培养基,如 DMEM 培养基(可能需要添加 L - 谷氨酰胺、葡萄糖、丙酮酸钠等),并补充 10% 热灭活的胎牛血清(FBS)、1% 的青霉素 - 链霉素混合液等。对于该稳转株,还需要在培养基中添加适量的嘌呤霉素(如 5 µg/ml)来维持其抗性筛选压力,但具体培养条件可能因实验需求和实验室习惯而略有差异。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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