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Hela299人宫颈癌细胞的处理方法

提供者:智立中特(武汉)生物科技有限公司   发布时间:2022/6/24 15:58:42  阅读次数:111次  进入该公司店铺

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一、细胞简介:

  Hela299细胞对脊髓灰质炎病毒有一定抗性;Hela299角蛋白免疫过氧化物酶染色阳性。

细胞名称:Hela299人宫颈癌细胞

  平台编号:zl-056686


  种属人

  年龄(性别)

  组织来源子宫颈;腺癌

  生长特性贴壁

  细胞形态上皮细胞样

  生长培养基RPMI-1640+10%FBS+1%P/S

  培养条件气相:空气,95%;CO2,5%温度:37℃

 二.细胞处理:

  1)冻存细胞的复苏:

  将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

  2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

  对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:

  1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

  2.加入0.25%(w/v)胰蛋白酶-0.53mMEDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

  3.轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

  3)细胞冻存:收到细胞后建议在培养3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

 下面T25瓶为例;

  1.细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.

  2.1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞,按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。

  3.将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

智立中特(武汉)生物科技有限公司是一家集生物研发,生产,销售,售后为一体的高新技术产业公司。拥有载体质粒,载体,国内外微生物菌种资源,感受态细胞,培养基,细胞株等广泛的生产销售线。

  质粒载体产品:

  提供各种类型载体宿主,基因种属类型,抗性,设计并构建质粒:大肠杆菌表达载体;哺乳动物表达载体;酵母表达载体;昆虫表达载体;植物表达载体;广;腺病毒载体...常用有pACYC184;pACYCDuet-1;pASK-IBA5plus+FUS(人基因);pAX01;pBABE-Puro;pBAD24

pBI121;pBIFC-bFosVC155;pBIFC-VC15;pCDFDuet-1;pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro;pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP-T2A-puro;pBIFC-VN155(I152L)addgene27097;pCDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro;pCAGGS;pBiFC-VN173(Plasmid#22010);pBlueScriptSK(+);pBlueScriptIISK(+);pBV220;pCas;pCas9

pBR322;pBT3-STE;pBudCE4.1以及结合转移质粒RP4;pGL4.25[luc2CP/minP];pGR106;pIRES2-AcGFP1-Nuc;psfGFP;pHEN1;pNL1.1[Nluc];pBBR1-GFP;pBMTB-5;pBMTB-4;pBMTB-3;pBMTB-2;pCAMBIA0305.1;pCX-DR;;pGreenII0800-miRNA;pK7GWIWG2(I);pRARE;pDG1663

  质粒菌种产品:

E.coliNissle1917;USA300:大肠杆菌JM108;希瓦氏菌属MR-1;E.coliW3110野生型;酿酒酵母W303a;酿酒酵母invsc1;酿酒酵母BY4741;酿酒酵母BY4742;毕赤酵母SMD1168H;PseudomonasputidaKT2440;E.coliMC1061;枯草芽孢杆菌WB800;根癌农杆菌EHA105;根癌农杆菌GV3101;CEN.PK2-1D;CEN.PK2-1C;全耐药鲍曼不动杆菌;哈维弧菌BB170

  菌种产品:

  提供模式菌种,科研菌种,普通菌种等菌种资源,有证质控样品等微生物标准品,芽孢悬液。常用药典菌种如:大肠埃希氏菌CMCC(B)44102、黑曲霉CMCC(F)98003,白色念珠菌CMCC(F)98001,枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501,铜绿假单胞菌CMCC(B)10104,生孢梭菌CMCC(B)64941;常用益生菌:长双歧杆菌(Bifidobacteriumlongum),嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus),鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus),类干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei),干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei);常用真菌:松口蘑Tricholomamatsutake,灰葡萄孢bio-81601cfcc50437Botrytiscinerea;灵芝,香菇,茯苓等


 原代细胞和细胞系产品:

  现取不同组织现分:不同来源人/鼠/兔/猪等不同组织如肺、气管、支气管、甲状腺、胰腺、垂体、肾上腺、扁桃体、胸腺、肾、膀胱、输尿管、列腺、心脏、血管。常用原代细胞有:气管上皮细胞;列腺上皮细胞;膀胱上皮细胞;输尿管上皮细胞;肾足细胞;内皮祖细胞;输卵管上皮细胞;乳腺上皮细胞

  公司提供细胞系人源做过STR鉴定,其他做过种属鉴定,确保产品无误后方可提供客户,形式冻存或复苏节省客户时间;确保实验顺利。常用细胞系有:WB-F344细胞;RG2[D74]细胞;NRK细胞;A7r5细胞;L6细胞;UMNSAH/DF-1细胞;MDBK(NBL-1)细胞;MDBK细胞;CCC-SMC-1细胞;PtK1(NBL-3)细胞;Mv1Lu细胞;Mv.1.Lu(NBL-7)细胞;F81细胞;CRFK细胞;MLTC-1细胞;MS1细胞;C3H/10T1/2,Clone8细胞;GL261细胞;P3X63Ag8.653细胞;HCC38细胞;ZR-75-30细胞;SK-LU-1细胞;NCI-H2087细胞;SK-N-MC细胞;Hs895.T细胞

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