RT-PCR、Western blot和ELISA三者的区别

RT‑qPCR 检测的是靶基因的 mRNA，属于转录水平。它先将样本 RNA 逆转录得到 cDNA，再通过荧光 PCR 扩增来反映初始模板量，主要得到 Ct 值和相对表达量，也可以做绝对定量。它灵敏度很高，微量样本就可以检测，但只能代表基因转录水平，mRNA 含量并不直接等于蛋白含量，会受到转录后调控、翻译效率和蛋白降解等因素影响，RNA 降解、基因组 DNA 污染也会干扰结果，多用于基因表达变化的研究。

Western blot 检测蛋白，属于翻译水平。蛋白经过电泳分离后转印到膜上，依靠抗体识别靶蛋白，显色成像，能观察蛋白条带的位置，以此判断蛋白分子量、是否存在降解或者不同剪接亚型。WB 以定性和半定量为主，依靠条带灰度值比较组间差异，重复性一般，样本通量低，不适合大批量样本检测，优势就是可以区分目的蛋白和相近大小的杂蛋白。

ELISA 同样检测蛋白，适合蛋白浓度的定量。依托固相载体上抗原抗体特异性结合，酶催化底物产生颜色，根据吸光度换算蛋白浓度。它的检测通量高，定量稳定性更好，血清、血浆、细胞上清、组织匀浆等多种基质都可以检测。但 ELISA 只能得到浓度数值，无法获取蛋白分子量信息，容易受到基质成分、异嗜性抗体等因素干扰，不能区分靶蛋白和分子量相近的干扰蛋白。

简单来说，RT-qPCR 看基因转录水平，Western blot 看蛋白有无、大小以及蛋白相对表达，ELISA 用来批量精确测定蛋白浓度。由于转录后调控的存在，三项实验的结果不一定同步，研究中经常联合使用，从转录和蛋白层面互相佐证。

可直接粘贴的精简版本：
RT‑qPCR 检测靶基因 mRNA，反映基因转录水平，灵敏度高，但 mRNA 水平不等同于蛋白表达量。Western blot 检测蛋白，可观察蛋白分子量、降解情况及蛋白亚型，多用于定性和半定量，样本通量低。ELISA 基于抗原抗体反应实现蛋白定量，适合大批量样本和体液基质检测，但无法获得蛋白分子量信息。受转录后调控影响，三者结果不一定一致，常联合使用，在转录与蛋白水平上相互佐证。