提供者：北京凡知医学科技有限公司 发布时间：2025/12/3 11:19:36 阅读次数：201次 进入该公司店铺
这一幕，是否似曾相识？元凶，很可能就是那个您以为“确定无疑”的DNA浓度！
当您发现同一个样本在Nanodrop和Qubit上测出的浓度相差甚远时，请不要时间怀疑仪器坏了。这背后，是两种截然不同的检测原理在“说话”。
原理：紫外吸光度法。通过测量DNA、RNA、蛋白质等在260nm、280nm等特定波长下的吸光度，来推算浓度。
优点：快速、简便、样品消耗极低，并能提供纯度信息（如A260/A280）。
致命弱点：无法区分杂质，低浓度定量有偏差。
Nanodrop方法是无法区分DNA和RNA的，也无法区分单核苷酸、核酸链和其它可在260nm处产生吸收峰的杂质。对于低浓度的核酸，由于仪器检测会有一个阈值线，受限于仪器的限制，Nanodrop测定低浓度核酸浓度时，会有较大程度偏差。
原理：荧光染料法。Qubit使用的染料非常“聪明”，它只会与完整的双链DNA（或特异性设计的单链DNA/RNA染料）特异性结合，并在结合后发出荧光。
优点：特异性极高，几乎不受常见污染物、核苷酸或降解片段的影响。
“缺点”：需要特定的染料和标准曲线，成本稍高，耗时稍长。
图1：Qubit和紫外吸收法对DNA-RNA混合样品的测定
通过对比不同方法的原理、结果趋势，可明确：Qubit荧光染料法更适配“区分核酸类型+高灵敏度定量”场景，对于需要精确DNA量的关键性下游应用，Qubit是毋庸置疑的更可靠选择。
Qubit检测试剂盒大多厂家提供的试剂盒检测范围为10pg-100ng，当加样量超出这个范围时，虽然可以检测到荧光信号，但计算出来的样本浓度是不准确的，当样品DNA浓度超过测定范围上限时，染料明显出现不足情况。
凡知医学的FireQubit dsDNA高灵敏检测试剂盒（FG4101）在对一系列不同浓度的dsDNA样本进行检测时，能够测定样本浓度，检测结果稳定可靠，性能，可满足高灵敏定量分析的需求（如下图所示）。
图2：测试结果
针对9个经过标准品系列梯度稀释的不同浓度(10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.156、0.0781、0ng/μL)的dsDNA样本用凡知医学提供的FireQubit dsDNA高灵敏检测试剂盒（FG4101）进行检测，结果如图所示：dsDNA 样本在0-100ng区间具有良好的线性关系，并且样本重复性较好。
RNA，ssDNA，有机物，蛋白质，盐离子等均会对dsDNA浓度测定造成干扰。比如Mg2+，dNTPs会造成荧光抑制。因此，dsDNA样本如果有高浓度杂质污染时，定量结果会存在较大偏差。
不过不必担心，凡知医学提供的FireQubit dsDNA高灵敏检测试剂盒（FG4101）对于DNA中常见的污染物，如高浓度醋酸铵、氯化镁、氯化钠等具有足够的耐受性（如下图所示）。
将凡知FireQubit dsDNA高灵敏检测试剂盒应用于存在高浓度污染物的样本中定量dsDNA，结果表现，抗污染能力强。
温度也是影响dsDNA定量的一个因素，当检测试剂温度较高时，样本和染料结合效率降低，荧光值随之会下降，造成定量结果偏低，反之亦然。因此我们在使用Qubit定量过程中，一定要等试剂恢复室温后再使用，且测量过程中，不要手握管子避光导致检测管内试剂温度发生变化；当室内温度发生剧烈波动时，需要重新校正仪器。
耗材对精确定量也有较大的影响。如0.5ml Qubit检测管的透光度，批间稳定性等会对低浓度（0ng-1ng）的dsDNA定量造成很大影响。
同一个样本，同一瓶试剂，不同的人定量的结果都可能会出现不同程度的偏差，这跟我们的实验习惯是有很大关系的。
01.样本加入后，一定要充分混匀，混匀后低速离心将试剂离心至管底部；
02.避免手握检测管底部，导致管内试剂温度变化；
03.不可在管壁进行标记或者摩擦管壁，以免影响荧光读取；
04.标准品检测管不要丢弃，可在样品测试完后，再测一下标准品管，以免仪器状态发生变化。
凡知医学
FireQubit dsDNA高灵敏检测试剂盒
货号：FG4101
规格：500 rxns
FireQubit dsDNA HS Assay Kit是一种简便快速、灵敏、准确度高的双链DNA(dsDNA) 荧光定量检测试剂盒。本试剂盒包含荧光检测试剂、标准品和缓冲液，对dsDNA有高度选择性，RNA干扰小，对于dsDNA样本在0.1-100ng之间有良好的线性关系，相比于传统的紫外检测(A260)方法，可更精确地对DNA进行定量，免除其它物质的干扰，可准确测定dsDNA浓度，提高实验的准确性。
本试剂盒操作简单，可使用荧光酶标仪或Qubit仪器进行检测。针对酶标仪高通量检测模式，特别包含了5个点的标准品，能使定量结果更加准确。
可以对浓度为0.1ng/µL-100ng/µL的dsDNA样品进行精确定量。
✅定量更精确：在ssDNA、RNA和单体核苷酸存在的条件下，可以选择性地检测低至0.1ng/µL的dsDNA。
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