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报告基因和凋亡检测新风向 ——原来实验也可以得心应手

提供者:亚科因(武汉)生物技术有限公司   发布时间:2025/1/16 17:14:09  阅读次数:108次  进入该公司店铺

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罗**
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报告基因是指转染后易于检测产物的基因,可作为标记物用于筛选成功转染的细胞,用于研究基因表达调控,或作为对照用于对转染效率进行标准化。其中,荧光素酶的应用较多,包括萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase,FLUC)和海肾荧光素酶(Renilla luciferase,RLUC)等。


双荧光素酶报告系统优势特点:

1. 萤光素酶和海肾萤光素酶种源同源性并对应不同的反应底物,故无交叉干扰。

2. 以Luciferase为核心,构建研究对象到相应位置,得出基因表达量,确定构建序列的功能,数据真实。

3. 双报告基因则通过共转染的“对照”作为内参为试验提供一基准线,在上减小细胞活性和转染效率等外在因素对实验的影响,使得结果更为可信。


双荧光素酶报告系统主要有5个应用方向:

验证microRNA同mRNA靶向互作。将待测基因的3’UTR序列插入报告基因载体,再共转入该microRNA,检测荧光素酶活性下降,则提示为其靶序列。

验证microRNA同lncRNA靶向互作。将待测lncRNA序列插入报告基因载体的3’UTR区域,检测荧光素酶活性。

启动子结构分析。将启动子区域(约2k左右)进行分段截短或突变,构建入报告基因载体,检测荧光素酶活性。

启动子SNP分析。一些基因的启动子区域存在单核苷酸多态性,可运用荧光素酶报告系统分析其相对活性。

验证信号通路是否激活。将该信号通路的下游相应元件序列构建入报告基因载体,检测不同上游条件下,其荧光素酶活性,即下游信号通路的响应情况。

荧光素酶报告基因以具有检测快速、灵敏度高、线性范围广,且在大多数哺乳动物细胞无内源性表达等诸多优点而备受青睐。因此,我们同步设计了两款试剂盒,针对不同的客户需求,两款试剂盒比较如下:

产品名称

双荧光素酶报告基因检测试剂盒

萤火虫荧光素酶检测试剂盒

组分

•Lysis Buffer (5×)

•Firefly Luciferase Assay Buffer

•Firefly Luciferase Substrate

•Renilla Luciferase Assay Buffer

•Renilla Luciferase Substrate (50×)

•Lysis Buffer (5×)

•Firefly Luciferase Assay Buffer

•Firefly Luciferase Substrate

功能

萤火虫荧光素酶信号检测

海肾荧光素酶信号检测

萤火虫荧光素酶信号检测

优势特点

检测迅速、灵敏度高、检测范围广,无细胞内源活性干扰

检测更迅速、灵敏度高、检测范围广

运用

归一化法定量准确

快速定量,成本低

同时细胞凋亡系列我们新进了一批性价比极高,口碑好的试剂盒,这里小编迫不及待推荐给大家。

Top1: 彗星试剂盒——细胞凋亡,DNA损伤检测



Top2: 线粒体转换孔通透性检测试剂盒——线粒体相关凋亡检测


A:Calcein AM 与L929细胞进行孵育,细胞质包括线粒体发出强绿色荧光;

B: 细胞进一步与CoCl2 孵育以后,细胞质内Calcein的绿色荧光被CoCl2淬灭,仅留下线粒体内的绿色荧光;

C: 使用Ionomycin (0.25μM)处理细胞,诱导细胞外的Ca2+大量进入细胞内,过多的Ca2+进入线粒体基质,导致MPTP的开放,使部分Calcein从线粒体内释放,同时使钴离子进入线粒体内并导致Calcein的绿色荧光淬灭。

经过对比,我们不难发现,Abbkine线粒体通透性转换孔(MPTP)检测试剂盒具有以下明显优势:

1、荧光亮度高(A);

2、准确性高:CoCl2和离子霉素淬灭率高(B和C)。


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