一、保留值与分离度重现性不好原因分析

二、造成色谱峰（不对称）拖尾的原因

1．色谱柱本身填装问题,筛板堵塞或填料塌陷；

2．柱头有污染；

3．样品超载；

4．样品溶剂不合适；

5．柱外效应；

6．化学或二次保留（硅羟基）效应；

7．缓冲容量不足或不合适；

8．重金属污染。

三、如何解决峰形拖尾的问题

A. 与化学有关的拖尾问题

1．流动相中，加入30mM的三乙胺（用于碱性化合物）或醋酸胺（用于酸性化合物），未知化合物加醋酸三乙胺；

2．如仍然拖尾，将三乙胺换为二甲基辛胺（或醋酸二甲基辛胺）；

3.降低进样量至<1μg。

B. 与色谱柱有关的拖尾问题

1.如柱头处有强保留的样品组分积聚，反相柱可用20倍柱体积的96%的二氯甲烷与4%甲醇，加1%氢氧化铵混合液冲洗；正向柱可用甲醇冲洗；

2.使用保护柱。

C. 与HPLC系统有关的峰拖尾和峰加宽

1.进样体积过大，（通常≤25μL）；

2.进样阀与色谱柱及检测器之间的管路体积过大（最佳连接管应<20cm，内径为0.007"）；

3.检测器流通池的体积过大。

四、如何贮存色谱柱

1.防止缓冲溶液和水溶液流动相产生微生物,做到流动相用多少配多少, 或在水流动相中加200ppm的叠氮钠以抑制细菌生长（一定当心其毒性和潜在的爆炸性）；或在流动相中加20%的有机改性剂，也可抑制微生物生长，有机改性剂还有助于流动相脱气。

2.尽可能将色谱柱贮存于100%有机溶剂（乙晴最好）中，避免在缓冲溶液中保存。

3.使用缓冲溶液后的色谱柱，应用15～20倍柱体积的不含缓冲剂的同种水-有机溶剂流动相冲洗色谱柱，后换成100%有机溶剂贮存。

4.避免用纯水冲洗键合致密的C18柱。

5.将色谱柱的两端用堵头拧好，以免柱床填料干裂。