平衡过程中，将流速缓慢地提高
　用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂度如果较低，则需要较长的时间来平衡）

色谱柱的再生 　　进行色谱柱再生时，应使用一个谦价的泵，我们建议最好不使用您的高效液相色谱仪上的泵。
表1　建议用来冲洗的溶剂体积
色谱柱尺寸 柱体积 所用溶剂的体积
125-4 1.6ml 30ml

250-4 3.2ml 60ml

250-10 -20ml 400ml

请根据下表选择您的再生方法：

极性固定相（如Si，NH2＊，DIOL基色谱填料）的再生：

正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水＊＊

非极性固定相（如反相色谱填料RP－18，RP－8，CN等）的再生：

水→乙腈→氯仿（或异丙醇）→乙腈→水

0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱

注意：

在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能成铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。

＊＊如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。