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FMK

MCE 国际站：FMK

CAS：821794-92-7

品牌：MedChemExpress (MCE)

存储条件：4°C, stored under nitrogen

生物活性：FMK 是一种不可逆的 RSK2 激酶抑制剂，可共价修饰 RSK 的 C 末端激酶结构域。 体外：用 3 μM fmk 预处理 ARVM 可减弱 Ser386 磷酸化的增加，但它对 Thr577 磷酸化的增加没有抑制作用^{[1]< /sup>。 FMK 抑制 panel 中相对较少的蛋白激酶，尽管它确实抑制蛋白酪氨酸激酶，例如 Src、Lck、Yes 和 Eph-A2，以及 S6K1。如果 N 端激酶结构域被独立于 C 端结构域的机制激活，FMK 将不会抑制 RSK^[2]。 Fmk 有效地灭活 RSK1 和 RSK2 的 CTD 自激酶活性，在哺乳动物细胞中具有高特异性。通过特定小分子 RSK 抑制剂 fmk 靶向 RSK2 可减弱 FGFR3 诱导的 Ba/F3 细胞细胞因子非依赖性生长。 FMK 抑制由 FGFR3^[3] 赋予的 Ba/F3 细胞的细胞因子非依赖性增殖。}

体外：用 3 μM fmk 预处理 ARVM 可减弱 Ser386 磷酸化的增加，但对 Thr577 磷酸化的增加没有抑制作用^[1]。 FMK 抑制 panel 中相对较少的蛋白激酶，尽管它确实抑制蛋白酪氨酸激酶，例如 Src、Lck、Yes 和 Eph-A2，以及 S6K1。如果 N 端激酶结构域被独立于 C 端结构域的机制激活，FMK 将不会抑制 RSK^[2]。 Fmk 有效地灭活 RSK1 和 RSK2 的 CTD 自激酶活性，在哺乳动物细胞中具有高特异性。通过特定小分子 RSK 抑制剂 fmk 靶向 RSK2 可减弱 FGFR3 诱导的 Ba/F3 细胞细胞因子非依赖性生长。 FMK 抑制由 FGFR3^[3] 赋予的 Ba/F3 细胞的细胞因子非依赖性增殖。

激酶试验：S6 肽激酶测定是根据制造商的方案使用 RSK2 免疫沉淀进行的。为了确定 FGFR3 磷酸化 RSK2 的能力，将 500 ng 纯化的重组 RSK2 变体与 500 ng 重组活性 FGFR3 在 10 mM HEPES (pH 7.5)、150 mM NaCl、1 mM DTT、0.01% Trixton-X-100 中孵育、10 mM MnCl2 和 200 μM ATP，30°C 30 分钟。 Y529 RSK2 的磷酸化可通过特异性磷酸抗体检测。为了确定 RSK2 CTD 变体的激酶活性，将纯化的重组 RSK2 CTD 蛋白 (500 nM) 与 500 nM 活性 ERK 在 20 mM HEPES [pH 8.0]、10 mM MgCl2、2 mM 三-(2-羧乙基)-膦中孵育(TCEP) 和 200 μM ATP，30°C 1 小时。通过添加 5 μCi 的 [γ-32P] ATP 和 100 μM 肽底物 (CTD-tide) 启动激酶反应，然后在室温下孵育 20 分钟。使用标准圆盘磷酸纤维素测定法测定激酶活性。

细胞试验：表达 RSK2 的 Ba/F3 细胞系是通过逆转录病毒转导产生的，如所述，使用稳定表达 FGFR3 TDII 的 Ba/F3 细胞和编码 myc 标记的 RSK2 变体的 pMSCV-puro 质粒，然后进行抗生素选择。对于细胞活力测定，将稳定表达 FGFR3 的 1×105 Ba/F3 细胞培养在 24 孔板中，培养基中含有浓度不断增加的 FMK、酸性 FGF (10 nM) 和肝素 (30 μg/mL)，且不含 IL -3。使用 Celltiter96AQueous One 溶液增殖试剂盒测定每个实验时间点的相对细胞活力。

研究领域：MAPK/ERK Pathway

作用靶点：Ribosomal S6 Kinase (RSK)

参考文献：
[1]. Cuello F, et al. Evidence for direct regulation of myocardial Na+/H+ exchanger isoform 1 phosphorylation ａnd activity by 90-kDa ribosomal S6 kinase (RSK): effects of the novel ａnd specific RSK inhibitor fmk on responses to alpha1-adrenergic stimulation.
[2]. Bain J, et al. The selectivity of protein kinase inhibitors: a further update. Biochem J. 2007 Dec 15;408(3):297-315.
[3]. Kang S, et al. FGFR3 activates RSK2 to mediate hematopoietic transformation through tyrosine phosphorylation of RSK2 ａnd activation of the MEK/ERK pathway. Cancer Cell. 2007 Sep;12(3):187-9.