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AZ3146

MCE 国际站：AZ3146

CAS：1124329-14-1

品牌：MedChemExpress (MCE)

存储条件：Powder: -20°C, 3 years; 4°C, 2 years.In solvent: -80°C, 6 months; -20°C, 1 month.

生物活性：AZ3146 是一种相当有效的 Mps1 和 TTK 抑制剂，对 Mps1^Cat 的 IC₅₀ 为 35 nM。 IC50 和目标：IC50：35 nM (Mps1)^[1]体外：在体外激酶测定中，AZ3146 抑制人 Mps1^Cat 的 IC₅₀ 约为 35 nM。 AZ3146 还有效抑制从人细胞中免疫沉淀的全长 Mps1 的自磷酸化^[1]。 TTK 特异性激酶抑制剂 AZ3146 可以降低 HCC 细胞的生长。在 SMMC-7721 和 BEL-7404 细胞上进行体外细胞毒性测定。 IC₅₀ 计算为 7.13 μM (BEL-7404) 和 28.62 μM (SMMC-7721)。两种细胞在IC50浓度下进一步处理4天。观察到细胞增殖受到显着抑制^[2]。 HCT116 细胞在 0.8 μM（GI₅₀）AZ3146 中培养 10 天，然后在 2 μM AZ3146 中培养 3 周。分离出 16 个克隆并生成细胞系，命名为 AzR1-16，所有这些克隆在细胞活力测定中都对 AZ3146 诱导的细胞死亡具有抗性； AzR3 和 4 的 GI₅₀ 约为 3 μM（4 倍抗性），而其余克隆的 GI₅₀ 约为 9 μM（11 倍抗性） .当通过延时显微镜分析有丝分裂时，2 μM AZ3146 会导致亲本细胞系在 10 分钟内迅速退出有丝分裂^[3]。

体外：在体外激酶测定中，AZ3146 抑制人 Mps1^Cat，IC₅₀ 约为 35 nM。 AZ3146 还有效抑制从人细胞中免疫沉淀的全长 Mps1 的自磷酸化^[1]。 TTK 特异性激酶抑制剂 AZ3146 可以降低 HCC 细胞的生长。在 SMMC-7721 和 BEL-7404 细胞上进行体外细胞毒性测定。 IC₅₀ 计算为 7.13 μM (BEL-7404) 和 28.62 μM (SMMC-7721)。两种细胞在IC50浓度下进一步处理4天。观察到细胞增殖受到显着抑制^[2]。 HCT116 细胞在 0.8 μM（GI₅₀）AZ3146 中培养 10 天，然后在 2 μM AZ3146 中培养 3 周。分离出 16 个克隆并生成细胞系，命名为 AzR1-16，所有这些克隆在细胞活力测定中都对 AZ3146 诱导的细胞死亡具有抗性； AzR3 和 4 的 GI₅₀ 约为 3 μM（4 倍抗性），而其余克隆的 GI₅₀ 约为 9 μM（11 倍抗性） .当通过延时显微镜分析有丝分裂时，2 μM AZ3146 会导致亲本细胞系在 10 分钟内迅速退出有丝分裂^[3]。

激酶试验：生成编码氨基酸 510-857 的带有 His 标签的人 Mps1Cat。对于激酶测定，向缓冲液中添加 500 ng（25 mM Tris-HCl，pH 7.4，100 mM NaCl，50 g/mL BSA，0.1 mM EGTA，0.1% β-巯基乙醇，10 mM MgCl2 和 0.5 g/mL 髓磷脂）碱性蛋白）、AZ3146 和 100 M γ-[32P]ATP（2 Ci/测定）。将反应物在 30°C 下孵育 20 分钟，点样到 P81 纸上，用 0.5% 磷酸洗涤，然后浸入丙酮中。磷酸盐的掺入通过闪烁计数来测定。对于免疫沉淀激酶测定，用诺考达唑处理 HeLa 细胞 14 小时，分离有丝分裂细胞，用 PBS 洗涤，并在 50 mM Tris-HCl，pH 7.4，100 mM NaCl，0.5% NP-40，5 mM 中裂解 30 分钟EDTA、5 mM EGTA、40 mM β-甘油磷酸、0.2 mM PMSF、1 mM DTT、1 mM 原钒酸钠、20 mM 氟化钠、1 M 冈田酸和完整的不含 EDTA 的蛋白酶抑制剂混合物。对全长 Mps1 进行免疫沉淀。用含有 100 mM NaCl 的裂解缓冲液洗涤纯化的复合物，并按照重组蛋白所述进行测定。为了定量 32P 掺入，用 SDS 样品缓冲液停止反应，并通过 SDS-PAGE 分离，然后进行磷光成像。使用 AIDA 软件使用磷光成像仪对板进行分析。为了评估 AZ3146 的特异性，使用激酶分析服务进行单点筛选。选择 50 种激酶并使用 1 M AZ3146
[1] 进行检测。

细胞试验：将TTK抑制剂AZ3146以100mM的浓度溶解在DMSO中，并用含有10％FBS的DMEM依次稀释成100μM、10μM、1μM和0.1μM使用前。进行体外细胞毒性测定。 HCC细胞以每孔3×103的密度接种到96孔板中。第二天按指定浓度添加 AZ3146。使用 CCK-8
[2]，每隔 24 小时培养和测试抑制剂处理的细胞 3-4 天。

研究领域：Cell Cycle/DNA Damage | Cytoskeleton

作用靶点：Mps1

参考文献：
[1]. Hewitt L, et al. Sustained Mps1 activity is required in mitosis to recruit O-Mad2 to the Mad1-C-Mad2 core complex. J Cell Biol. 2010 Jul 12;190(1):25-34.
[2]. Liu X, et al. TTK activates Akt ａnd promotes proliferation ａnd migration of hepatocellular carcinoma cells. Oncotarget. 2015 Oct 27;6(33):34309-20.
[3]. Gurden MD, et al. Naturally Occurring Mutations in the MPS1 Gene Predispose Cells to Kinase Inhibitor Drug Resistance. Cancer Res. 2015 Aug 15;75(16):3340-54.