实时荧光定量PCR是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。
荧光PCR方法检测病原体已成为常规检测技术，在工作过程中我们也遇到了各种各样、千奇百怪的问题，那么在PCR仪出现故障的时候应该怎么解决呢？
01反应后反应管壁出现液滴?
原因1：运行程序前没有开启热盖加热功能
解决方法：开启热盖加热功能
原因2：反应结束后低温保存时间过久
解决方法：运行结束后，热盖将自动关闭，所以冷凝会自然出现，这不会对实验结果产生影响，将反应管置于离心机上瞬时离心机使液滴回到管子底部即可。
02反应管气泡在 PCR 反应时，加热破裂
反应时在实验过程中出现了气泡，导致中途产生了较大的波动，其特点是单个样本的几个通道的荧光曲线同时在某个循环出现趋势一致的波动。
分析原因：气泡在 PCR 反应的过程中被加热，在某个时刻破裂，此时出现荧光扰动，在这个循环检测到的荧光型号和上一个循环不一样，此时如果波动位于基线期很可能就被软件识别为开始扩增的拐点，扩增曲线就会产生结果。
03使用微孔板，
反应后反应液有明显蒸发？
方法1：确保使用高质量的微孔板，反应前要严格密封；
方法2：确保盖热盖，适当提高热盖的温度；
方法3：增大反应体积。
04使用PCR管，
反应后PCR的管内反应液有明显蒸发？
方法1：确保使用高质量的PCR管；
方法2：在样品台的四角放置四个同样的空PCR管，以保证热盖压在哥PCR管上的压力均匀。
05PCR实验结束后，
样品可以一直放在PCR仪中低温保存嘛？
当程序运行结束后，及时取出样品并停止仪器运行，而不要把仪器当“冰箱”使用，低温保存时温度尽量设定得比较高，如8℃，这可以延长仪器的使用寿命。
版权声明