细胞ERK1/2激酶总活性光度法定量检测试剂盒抑制剂筛选

1． 在96孔板上做好相应标记：背景、wan全活性和待测抑制剂样品

2． 按下表加入试剂，进行样品预处理

3． 分别移取100微升缓冲液（Reagent C）到新的96孔板的所有孔里

4． 分别加入20微升酶促液（Reagent D）

5． 分别加入20微升反应液（Reagent E）

6． 分别加入20微升底物液（Reagent F）

7． 轻轻摇动96孔板

8． 在30℃温度下孵育3分钟

9． 加入40微升上述预处理的待测样品

10． 即刻放进30℃酶标仪检测：测读30分钟

11． 抑制活性计算：

1) [（wan全活性读数－空背景对照读数）－（抑制剂样品活性读数－样本背景读数）]÷（wan全活性读数－空背景对照读数）＝实际抑制百分率

2) IC50：50％抑制率所需的抑制剂浓度

X（所需抑制剂样品浓度）＝（已知抑制剂样品浓度÷实际抑制百分率）X 50％

3) 直接构建抑制曲线：纵座标（Y轴）为吸光单位（OD）；横座标（X轴）为已知抑制剂浓度

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