组织样品亚细胞结构分离试剂盒产品说明书

主要用途

组织样品亚细胞结构分离试剂是一种旨在通过组织裂解和差速离心而获得动物组织细胞核、细胞浆和细胞器组分的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适宜于各种动物组织的亚细胞结构和功能的研究和鉴定。产品不含污染性蛋白酶和核酶，即到即用，性能稳定，操作简便，分离清晰，成分完整。

技术背景

细胞分离成亚细胞结构成分单位是细胞生物学研究的基本手段。采用轻柔的机械物理方法或化学去污剂方法实现细胞裂解，然后运用差速离心的方法将细胞成分分离，由此获得独立的保留其原生化特性的具有活力的细胞器和大分子成分，从而进行细胞器和亚细胞部位的结构与功能的相关研究，同时检测各种分子元素的定位、运作和运输。

产品内容

清理液（Reagent A）毫升

保存液（Reagent B）毫升

萃取液（Reagent C）毫升

活性液（Reagent D）微升

产品说明书1份

保存方式

保存活性液（Reagent D）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月

用户自备

HANK平衡盐溶液（G&VS12028）或PBS溶液（G&VS12033）：用于清理细胞

1.5毫升离心管：用于细胞组分操作和保存的容器

2毫升离心管：用于细胞组分操作的容器

50毫升锥形离心管：用于细胞收集后离心的容器

台式离心机：用于细胞组分分离

超速离心机：用于分离纯化细胞浆成分

DOUNCE匀浆器：用于溶解细胞

显微镜：用于观察细胞分离组分

实验步骤

实验开始前，将试剂盒里的活性液（Reagent D）从－70℃的冰箱里取出，放进冰槽里。溶化后，分别移出xx微升活性液（Reagent D）和xx毫升的萃取液（Reagent C）到1.5毫升离心管里，混匀后，标记为萃取工作液，放进冰槽里。然后进行下列操作。

一、 组织预处理

1． 手术取出动物组织，并秤重以确定1克组织重量（实验前使动物空腹12至24小时）

2． 放进预冷的50毫升锥形离心管

3． 加入10毫升用户自备的HANK平衡盐缓冲溶液或PBS缓冲溶液到每个细胞培养瓶

4． 小心抽去清洗液

5． 移入一个液氮冻存管

6． 即刻放入液氮罐过夜

7． 次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）碾碎组织成粉末（注意：切莫使组织冻融）

8． 放进一个50毫升锥形离心管

9． 加入xx毫升清理液（Reagent A），充分混匀组织粉末

10． 放进冰槽里（接到实验步骤二的第1步）

11． 移出500微升组织混匀物到1.5毫升离心管

12． 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为500g（或2500rpm，例如EPPENDORF 5415D）

13． 小心抽去上清液

14． 加入xx微升保存液（Reagent B），轻轻混匀

15． 放进－70℃冰箱里长期保存――这是未分离的组织样品

二、组织细胞核组分分离

1． 将上述实验步骤一的第10步在冰槽里的50毫升锥形离心管放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为200g（或1000rpm，例如EPPENDORF 5810R）

2． 小心抽去50毫升锥形离心管的上清液

3． 加入xx毫升含有活性液（Reagent D）和萃取液（Reagent C）的萃取工作液，充分混匀细胞颗粒群

4． 即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器，用匀浆棒匀化细胞10下

5． 置于冰槽中孵育30分钟

6． 再次使用匀浆棒匀化细胞40下

（选择步骤：移出50微升细胞匀浆物在载玻片上，通过显微镜观察，细胞溶解而细胞核是完整的；如果细胞没有溶解，显微镜下可见发亮的细环状结构，这样需要进一步匀化细胞，但切莫过度匀化细胞）

7． 移取所有细胞匀浆物到2毫升离心管

8． 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为500g（或2500rpm例如EPPENDORF 5415D）

9． 小心移出上清液到新的1.5毫升离心管

10． 加入xx微升萃取液（Reagent C）到上述2毫升离心管，充分混匀沉淀颗粒

11． 放进预冷的DOUNCE匀浆器匀化40下

12． 置于冰槽中孵育15分钟

13． 再次使用匀浆棒匀化细胞40下

14． 移回所有匀浆物到2毫升离心管

15． 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为500g（或2500rpm例如EPPENDORF 5415D）

16． 小心移出上清液合并到上述实验步骤二的第9步的1.5毫升离心管

17． 再次加入xx毫升萃取液（Reagent C）到2毫升离心管，充分混匀沉淀颗粒

18． 同时将1.5毫升离心管和2毫升离心管放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为500g（或2500rpm例如EPPENDORF 5415D）

19． （分别）小心移出上清液（合并）到1个超速离心管（接到实验步骤三的第1步或第5步）

20． 分别加入xx微升保存液（Reagent B）到1.5毫升离心管和2毫升离心管，轻轻混匀沉淀颗粒

21． 合并成1管，放进－70℃冰箱里长期保存――这是细胞核成分，其中包含细胞核和细胞骨架集聚物

三、组织细胞器和细胞浆组分分离

1． （选择步骤）将实验步骤二的第19步的上清液，放进4℃微型台式离心机离心30分钟，速度为10000g（或10000rpm例如EPPENDORF 5415D）

2． （选择步骤）小心移出上清液（这是粗提细胞浆成分）到新的超速离心管

3． （选择步骤）加入xx微升保存液（Reagent B）到沉淀颗粒，轻轻混匀

4． （选择步骤）移入到1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里长期保存——这是线粒体成分

5． 将实验步骤二的第19步的上清液或实验步骤三的第4步的上清液，放进4℃超速离心机离心60分钟，速度为100000g（注意：参见注意事项7）

6． 小心移出3毫升上清液到2个新的1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里长期保存——这是纯化细胞浆成分

7． 加入xx微升保存液（Reagent B）到沉淀颗粒，轻轻混匀

8． 移入到1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里长期保存——这是其它细胞器成分

注意事项

1． 本产品为10次操作

2． 所有操作均须在4℃状态下进行

3． 细胞核组分可以被用来进行电泳迁移率变动分析实验去研究转录因子或活体外转录反应；P53可作为细胞核成分的标准对照

4． 对于易于脆裂的细胞核或难以溶解的组织，采用化学去污剂加上物理匀浆法是优先推荐的技术处理

5． 实验步骤二的第6至19步，旨在尽最大可能溶解组织细胞，充分获得各种组分，建议用户进行操作；如果用户没有这一需求，可以跳过实验步骤二的第9至18步

6． 实验步骤三的第1至4步，旨在获得独立的线粒体组分，如果用户没有这一需求，可以跳过

7． 获得细胞浆成分，可以采取不同离心速度：最低不得低于10000g（或10000rpm例如EPPENDORF 5415D），由此获得的便是粗提细胞浆组分；根据用户需求，增加离心速度，其纯度相应增加，最高不要超过速度为100000g

8． 所有组分建议保存在－70℃冰箱里，长期保持活性

9． 本产品保留所有细胞内成分

10． 本产品的分离成分可用于各种后续操作

11． 本公司提供系列亚细胞分离和分析试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶

3． 本产品经鉴定亚细胞结构分离清晰，维持正常活性

使用

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK，RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组分订购信息

编号名称规格

G&VS10005.2组织样品亚细胞结构分离试剂盒10次

G&VS10005.2A清理液（Reagent A）毫升

G&VS10005.2B保存液（Reagent B）毫升

G&VS10005.2C萃取液（Reagent C）毫升

G&VS10005.2D活性液（Reagent D）微升

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