组织溶酶体脂酶（酸性脂酶）活性比色法定量检测试剂盒产品说明书

主要用途

组织溶酶体脂酶（酸性脂酶）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过溶酶体脂酶反应系统中，在选择性抑制剂存在与否的情况下，底物胆固醇油酸酯水解后的游离脂肪酸，与醋酸铜反应后的蓝绿色产物，呈现吸光峰值的变化，即采用比色法来测定组织裂解萃取样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种组织裂解样品（动物、人体、昆虫等）溶酶体脂酶的活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

组织溶酶体脂酶（酸性脂酶）活性比色法定量检测试剂盒产品说明书技术背景

溶酶体酸性脂酶（lysosomal acid lipase；LAL；EC3.1.1.13），又称为酸性胆固醇酯水解酶（acid cholesteryl ester hydrolase），是脂蛋白代谢中的水解酶（hydrolase）之一，含有372氨基酸的糖蛋白，存在于除红细胞外的所有组织细胞中的溶酶体内。在酸性环境下，通过水解胆固醇酯（cholesterol ester）和甘油三酯（triacylglycerols）键，以降解细胞内的脂蛋白，释放出游离脂肪酸，调节细胞内的脂类代谢，尤其是胆固醇合成和甘油三酯代谢。溶酶体脂酶缺陷将导致伍尔曼氏病（Wolman disease）和胆固醇酯储积病（Cholesteryl Ester Storage Disease）。溶酶体脂酶具有治疗动脉粥样硬化（atherosclerosis）和外周血管性疾病的潜力。基于底物胆固醇油酸酯（cholesterol oleate），在溶酶体酸性脂酶特异性抑制剂氯丙嗪（chlorpromazine）存在与否的情况下，通过溶酶体酸性脂酶的水解催化，产生游离脂肪酸油酸（oleate），继而与生色试剂醋酸铜反应，产生蓝绿色铜盐复合物，在分光光度仪下，其吸光值的变化（715nm 波长），来定量测定溶酶体酸性脂酶的活性。其反应系统为：

组织溶酶体脂酶（酸性脂酶）活性比色法定量检测试剂盒产品说明书产品内容

清理液（Reagent A） 毫升

裂解液（Reagent B）毫升

缓冲液（Reagent C） 毫升

底物液（Reagent D） 毫升

稀释液（Reagent E）毫升

显色液（Reagent F）毫升

性液（Reagent G）毫升

标准液（Reagent H）毫升

产品说明书 1份

保存方式

保存在4℃冰箱里，稀释液（Reagent E）和标准液（Reagent H）具有挥发性和毒性，注意密闭瓶盖和操作安全；保质期：6月

组织溶酶体脂酶（酸性脂酶）活性比色法定量检测试剂盒产品说明书用户自备

1.5毫升离心管：用于样品操作的容器

2毫升离心管：用于样品操作的容器

15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器

DOUNCE匀浆器：用于裂解细胞

（微型）台式离心机：用于样品操作

比色皿：用于比色的容器

分光光度仪：用于比色分析

实验步骤

一、 样品准备

1． 手术取出动物组织，并秤重以确定500毫克组织重量

2． （选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管

3． （选择步骤）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗1次

4． 移入到一个液氮冻存管

5． 即刻放进液氮罐过夜

6． 次日从液氮罐里取出，即刻（快速度）用研磨棒碾碎组织成粉末状（注意：切莫使组织冻融）

7． 放进一个15毫升锥形离心管

8． 加入xx毫升裂解液（Reagent B），充分混匀

9． 涡旋震荡5，充分混匀组织颗粒群

10． 即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器

11． 在冰槽里用匀浆棒匀化组织细胞（约20至40下）

12． 将所有组织细胞匀浆物移入1.5毫升离心管

13． 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为800g

14． 小心移出上清液到另一个新的预冷的1.5毫升离心管

15． 放进4℃微型离心机离心15分钟，速度为10000g

16． 小心抽去上清液，保留沉淀颗粒

17． 加入xx微升缓冲液（Reagent C）

18． 强力涡旋震荡15

19． 移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－GMS30030.1）

20． 即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作

二、 测定准备

1． 准备好待测样品（例如组织裂解样品等），置于冰槽里

2． 设定好分光光度仪（温度为37℃）：波长715nm，使用稀释液（Reagent E）置零

3． 缓冲液（Reagent C）室温下均衡温度

三、标准样品配制

1． 准备好4个1.5毫升离心管，标记为1至4号管

2． 分别加入xx微升稀释液（Reagent E）到2至4号管

3． 移取xx微升标准液（Reagent H）到1号管

4． 小心移取xx微升1号管的标准液（Reagent H）到2号管，混匀

5． 小心移取xx微升2号管稀释的标准液（Reagent H）到3号管，混匀

6． 将1至4号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表

四、 标准曲线测定

1． 移取xx微升稀释液（Reagent E）到2毫升离心管

2． 加入xx微升上述配制的标准液（Reagent H）

3． 加入xx微升显色液（Reagent F）

4． 涡旋震荡60

5． 放进微型台式离心机离心5分钟，速度为1000g

6． 小心移取1毫升蓝绿色上层液相到新的比色皿

7． 即刻放进分光光度仪检测：获得吸光读数

8． 重复实验步骤1至7四次

9． 构建标准曲线：纵座标（Y轴）为吸光读数；横座标（X轴）为标准油酸浓度（毫摩尔/升）

五、 背景对照测定

1． 移取xx微升缓冲液（Reagent C）到2毫升离心管

2． 加入xx微升底物液（Reagent D）

3． 加入xx微升稀释液（Reagent E）

4． 涡旋震荡60

5． 37℃温度下孵育30分钟

6． 移取100微升到新的2毫升离心管

7． 加入xx毫升稀释液（Reagent E）

8． 加入xx微升显色液（Reagent F）

9． 涡旋震荡60

10． 放进微型台式离心机离心5分钟，速度为1000g

11． 小心移取1毫升上层液相到新的比色皿

12． 即刻放进分光光度仪检测：获得背景吸光读数

六、样品总活性测定

1． 移取xx微升缓冲液（Reagent C）到2毫升离心管

2． 加入xx微升底物液（Reagent D）

3． 加入100微升上述制备的待测样品（50微克样品蛋白）

4． 涡旋震荡60

5． 37℃温度下孵育30分钟

6． 移取100微升到新的2毫升离心管

7． 加入xx毫升稀释液（Reagent E）

8． 加入xx微升显色液（Reagent F）

9． 涡旋震荡60

10． 放进微型台式离心机离心5分钟，速度为1000g

11． 小心移取1毫升蓝绿色上层液相到新的比色皿

12． 即刻放进分光光度仪检测：获得样品吸光读数

13． 实际吸光读数：样品吸光读数—背景吸光读数

14． 根据标准曲线获得样品对应油酸浓度（毫摩尔/升）

七、 样品非特异活性测定

1． 移取xx微升缓冲液（Reagent C）到2毫升离心管

2． 加入xx微升底物液（Reagent D）

3． 加入xx微升性液（Reagent G）

4． 加入100微升上述制备的待测样品（50微克样品蛋白）

5． 涡旋震荡60

6． 37℃温度下孵育30分钟

7． 移取100微升到新的2毫升离心管

8． 加入xx毫升稀释液（Reagent E）

9． 加入xx微升显色液（Reagent F）

10． 涡旋震荡60

11． 放进微型台式离心机离心5分钟，速度为1000g

12． 小心移取1毫升蓝绿色上层液相到新的比色皿

13． 即刻放进分光光度仪检测：获得吸光读数

14． 实际吸光读数：样品吸光读数—背景吸光读数

15． 根据标准曲线获得样品对应油酸浓度（毫摩尔/升）

八、 计算样品活性

1） 样品总活性和非特异活性计算

2） 样品特异活性计算

注意事项

1． 本产品为20次操作，包括背景对照

2． 操作时，须戴手套

3． 系统操作过程中，背景测定只需1次

4． 样品须澄清，至关重要

5． 比色测定后，比色皿须清洗彻di

6． 样本读数高于背景读数表明具有酶活性

7． 建议待测样本蛋白浓度为50微克/100微升；如果样本酶活性过低或过高，则可以增加或降低样本量（本公司提供Bradford蛋白质浓度定量试剂盒GMS30030.1）

8． 如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度

9． 溶酶体酸性脂酶单位活性定义为：在37℃，pH 5.0条件下，每分钟内能够释放1微摩尔游离脂肪酸所需的酶量作为一个活性单位

10． 本公司提供系列细胞脂类酶学检测试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定检测敏感

使用承nuo

秉着“信誉至上、客户满意、质量承nuo”的宗旨为我们的用户提供优zhi产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在保质期内使用。我们的产品在销售已作严格的质量鉴定，bao证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组份订购信息

编号名称规格

GMS50100.2组织溶酶体脂酶（酸性脂酶）活性比色法定量检测试剂盒20/80次

GMS50100.2A清理液（Reagent A）毫升

GMS50100.2B 裂解液（Reagent B）毫升

GMS50100.2C缓冲液（Reagent C）毫升

GMS50100.2D 底物液（Reagent D）毫升

GMS50100.2E 稀释液（Reagent E）毫升

GMS50100.2F显色液（Reagent F）毫升

GMS50100.2G性液（Reagent G）毫升

GMS50100.2H标准液（Reagent H）毫升

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