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田鼠分枝杆菌PCR检测试剂盒反应液的配制

提供者:上海谷研实业有限公司   发布时间:2021/3/30 13:43:09  阅读次数:3563次  进入该公司店铺

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田鼠分枝杆菌PCR检测试剂盒反应液的配制:
PCR反应体系的配置方式有时也会影响反应的正常进行。常规方法与其它酶学反应样,在后加入DNA聚合酶。早期的PCR仪没有带加热的盖子,要求在反应液上覆盖层矿物油,防止水分蒸发。
对于使用具3’-5’外切活性的高温DNA聚合酶时,有时会扩增不出产物。在遇到这个问题时,如果将反应成分分开配制,A管含模板、引物和dNTP,以及调整体积的H2O,B管含缓冲液、DNA聚合酶和水,然后再将两管溶液混合起来,可较好地克服这个问题。
按照常规的方法配制反应体系,有时会出现非特异性扩增的问题。热启动(hotstart)PCR操作方式可较好解决这问题。将dNTP、缓冲液,Mg2+和primer先配制好,然后加入粒蜡珠(如AmpliWaxPCRQam100),加热熔化,再冷却,使蜡将溶液封住,后加入模板和DNA聚合酶等剩余成分。只有当PCR反应进入高温阶段后,蜡层熔化,所有反应成分才会混合在起。
组成及试剂配制:
1、酶标板:块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
使用及效果:将本产品15 μL 与用户自备的模板,引物和水共15 μL 混合后,直接进行PCR反应(PCR 参数由用户自己确定),反应结束后直接取10 μL 电泳检查扩增结果。
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