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疟原虫通用LAMP试剂盒实验操作步骤

提供者:上海谷研实业有限公司   发布时间:2021/1/12 13:38:49  阅读次数:3428次  进入该公司店铺

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疟原虫通用LAMP试剂盒操作步骤:
1:样品准备:取1毫升细胞培养上清(贴壁和悬浮细胞都可以,*已培养48小时以上),在16000g离心5分钟,小心弃去上清,避免丢失沉淀(沉淀量有可能很少,目视看不到)。将沉淀用无菌PBS重悬,在16000g离心5分钟,同样小心弃去上清,如此反复用无菌PBS洗三次。*将获得的沉淀用100微升超纯水重悬,置于100℃水浴中孵育5分钟。如此制备好的样品可在4℃保存1到2个月。
2:PCR反应的准备:
待各组份融化后先瞬时离心,然后轻弹混匀。按下表在已灭菌的PCR管中配制反应体系,每次实验需加个阴性和个阳性对照,测试反应管可以有多个。配制过程中应注意无菌,戴口罩,并注意避免操作产生的气溶胶造成样品间的交叉污染,推荐在有风压的设备如超净台或生物安全柜中进行操作。建议配制完毕后瞬时离心以使液体沉至管底。
注意事项:
1. 建议使用新鲜采取的动物组织,若为长期冷冻组织,应尽量避免反复冻融,否则会导致模板的降解,影响PCR效率。
2. 试剂Buffer AL若低温保存,易产生沉淀。在使用务必将其在室温中放置段时间,也可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀,混匀后再使用。
3. 电泳检测时,切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否则,电泳时会在泳道中出现大团拖尾亮带,影响实验结果。
4. 建议扩增片段长度1 kb以内,以便扩增效率佳。
5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴次性手套操作。
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