免疫组化，是应用免疫学基本原理－－抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。

1.切片，烤片60℃，1h；

2.脱蜡及复水：二甲苯10min，100％乙醇5min，95％乙醇5min，90％乙醇5min，85％乙醇5min，80％乙醇5min， 75％乙醇5min，60％乙醇5min，50％乙醇5min，30％乙醇5min，自来水1min，双氧水1min；

3.1份30％H2O2加10份蒸馏水，室温10min，蒸馏水洗3次，每次3min；

4.微波修复：将切片浸入0.01M枸橼酸缓冲液，微波中最大火力（98℃-100℃）加热至沸腾，冷却（约5-10min），反复两次；

5.将切片自然冷却至室温，PBS洗涤3次，每次5min；

6.封闭，5％BSA，室温20min，甩去多余液体；

7.滴加一抗，37℃，1h，或者4℃过夜；

8.PBS洗涤3次，每次3min；

9.滴加二抗，37℃，15-30min；

10.PBS洗涤3次，每次3min；

11.滴加SABC，37℃， 30min；

12.PBS洗涤3次，每次5min；

13.1ml蒸馏水中分别滴加显色剂，混匀；

14.DAB显色剂配置好后，滴加于切片，室温，镜下检测反应时间（约5min）；

15.自来水冲洗干净，过蒸馏水；

16.苏木素复染2min，自来水冲洗；

17.脱水：30％乙醇3min，50％乙醇3min，70％乙醇3min，80％乙醇3min，90％乙醇3min，95％乙醇3min，100％乙醇3min，二甲苯20min；

18.树胶封片，镜检。

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