摘要： 使用液-液萃取以及 Bond Elut EMR-Lipid 增强型脂质去除产品 (EMR-Lipid) 和 PSA/C18/MgSO4 dSPE (PSA/C18/MgSO4) 净化，对南瓜籽油中欧盟 (EU) 规定的优先 多环芳烃 (PAH) 进行分析。利用配备 Agilent JetClean 智氢洁离子源 (JetClean) 和反 吹 (BF) 的气相色谱三重四极杆质谱仪 (GC/MS/MS) 对 PAH 进行定量分析。JetClean 在分析过程中引入低流速氢气，可防止 PAH 在离子源中沉积。使用后运行柱中 BF 可延长色谱柱寿命。在 PAH 的多反应监测 (MRM) 分析过程中，使用高碰撞能量 (50 eV) 来消除基质干扰。对于预加标浓度为 1、10 和 50 ng/g 的中间洗脱 PAH， PAH 回收率在欧盟法规限值 50%–120% 的范围内。重 PAH 仅在 50 ng/g 的预加标 浓度下符合欧盟法规限值规定。除预加标浓度为 1 ng/g 的 苯并(a)芘的 RSD 为 23% 外，研究的所有其他 PAH 的回收率 RSD 均低于欧盟法规限值 20%。利用精密度和准 确度分析来验证方法定量性能，在所有三个预加标浓度下，准确度为 100% ± 20%， 且 RSD < 20%。除环戊烯(cd)芘和 5-甲基䓛的定量限为 10 ng/g 外，所研究的所有其 他 PAH 的定量限 (LOQ) 均为 1 ng/g。线性校准结果的 R2 > 0.99。


前言 ：PAH 是由两种或更多种仅含有碳和氢的 芳香环组成的一组有机化合物。PAH 在 工业食品加工（烘焙、干燥等）、高温烹 饪（油炸、烧烤等）或环境暴露（化石燃 料或木材的不完全燃烧等）中形成。使用 火焰直接加热的种子和籽粒干燥过程被认 为是食用油中最主要的 PAH 来源[1]。种子 烘焙过程中使用的高温是可能引起食用油 污染的另一个原因。环境暴露（例如植物 暴露于工业和机动车排放物）也可能导 致食用油中 PAH 的生成。由于 PAH 的亲 脂性，脂肪和脂质是饮食中 PAH 的主要 来源[2]。 自 2005 年以来，欧盟委员会 (EC) 法规 规定了不同类别食品中的苯并(a)芘以及 由食品科学委员会 (SCF) 确定为致癌物 的其他 15 种 PAH 分析物的最高含量。 粮农组织/世界卫生组织食品添加剂联合 专家委员会 (JECFA) 还将苯并(c)芴确定 为需要监测的 PAH。EC 法规 1881/2006 和 835/2011 中规定了供人食用或用作 食品成分的油脂中 PAH 残留的最大允 许含量，其中苯并(a)芘的最大允许含量 为 2.0 µg/kg，苯并(a)芘、苯并(a)蒽、 苯并(b)荧蒽和䓛的总最大允许含量为 10 µg/kg[3,4]。


安捷伦增强型脂质去除 (EMR-Lipid) dSPE 净化产品自 2015 年推出以来便备受关 注。EMR-Lipid dSPE 吸附剂与脂类的无 支链烃链发生选择性相互作用，在溶液中 留下大量目标分析物以供后续分析。这使 得 EMR-Lipid 成为多类别和多残留分析的 理想选择。EMR-Lipid 吸附剂可方便有效 地消除基质干扰（特别是脂质），从而检 测低浓度的目标分析物[5,6]。在 EMR-Lipid dSPE 净化后，使用含 MgSO4 和 NaCl 的 EMR-Polish 分散试剂盒除去残留的水， 这对于 GC/MS/MS 分析至关重要。然 后，使用 PSA/C18/MgSO4 dSPE 净化进 一步净化基质和除水。

PAH 分析面临的挑战缘于其化学特性， 因此，我们对 GC/MS/MS 进行了改进以 用于分析[7]。PAH 往往粘附到表面上， 易于凝结，且难以气化。因此，GC 进样 口、MSD 传输线和 MSD 离子源保持在高 温条件下，以最大程度减小表面接触并促 进气化。JetClean 在数据采集过程中引 入低流速氢气，从而保持离子源清洁[8]。 进样口衬管包含玻璃毛以进行传热并防止 PAH 沉积在衬管底部。反吹能够在每次 分析结束时去除重洗脱基质，从而维持色 谱柱寿命[9]。由于 PAH 难以改变，因此在 所有 PAH MRM 采集中使用 50 eV 的高碰 撞能量来消除基质干扰，同时 PAH 不会 受到影响

本应用简报研究对象为南瓜籽油，因为 其基质脂肪含量高且复杂，受到 PAH 污 染的可能性高。南瓜籽油中的脂肪酸组 成主要包括棕榈酸 (9.5%–14.5%)、硬脂 酸 (3.1%–7.4%)、油酸 (21%–46.9%) 和 亚油酸 (35%–60.8%)[10]。南瓜籽油通过在 100 °C 以上烘烤南瓜籽，并使用液压机 将种子压成深绿色油而制成。除烘焙过程 以外，南瓜籽油中 PAH 污染的另一种可 能性在于缺少精炼步骤（精炼可大大降低 PAH 的含量）[1]。


实验部分 ：溶剂和样品前处理产品 本研究中所用的溶剂为 HPLC 级或 GC 级。乙腈 (ACN) (271004) 和异辛烷 (650439) 购自 Sigma-Aldrich。 用于样品净化的样品前处理产品包括以下 内容： • 置于 15 mL 离心管中的 Bond Elut EMR-Lipid 分散 SPE (EMR-Lipid)（部 件号 5982-1010） • 置于含 NaCl 和无水 MgSO4 的 1 mL 离心管中的 Bond Elut EMR-Lipid 除 脂萃取盐包 (EMR-Polish)（部件 号 5982-0101） • QuEChERS 分散 SPE，适用于 EN 方 法，置于 15 mL 离心管中，含 150 mg PSA、150 mg C18EC 和 900 mg MgSO4 (PSA/C18/MgSO4)（部件号 5982-5156）

标样和溶液 PAH 混标 (STD) 由 PAH 混标（部件号 5191-4508）组成。同位素标记的内标混 合物 (IS) 由氘代 PAH（部件号 5191-4509） 组成。对于预加标质量控制 (QC) 样品， 在异辛烷中制得所需浓度的纯 STD 和 IS 加标溶液，并直接加入南瓜籽油中。对 于后加标基质匹配校准样品，在异辛烷中 制得所需浓度的纯 STD 和 IS 加标溶液， 并用于复溶干燥的基质空白 (MB) 样品。 预加标和后加标浓度为 1、10 和 50 ng/g STD 以及 50 ng/g IS。基质匹配校准 浓度为 STD 1、2、5、10、25、50 和 100 ng/g STD 以及 50 ng/g IS。

样品前处理 本研究中使用从商店购买的烘烤南瓜籽 油。用 ACN 萃取样品，然后使用 EMRLipid 进行样品净化，并使用 EMR-Polish 除去残留的水。利用 PSA/C18/MgSO4 净 化进一步净化基质和除水。图 1 所示为样 品前处理的详细步骤。 GC/MS/MS 分析 本研究中使用的 GC/MS/MS 为 Agilent 7890B 气相色谱仪和配备 JetClean 智 氢洁离子源和 Agilent 7693A 自动液体 进样器 (ALS) 的 Agilent 7010 三重四极 杆 GC/MS。表 1–3 和图 2 列出了 GC 和 MSD 的详细参数。使用 MassHunter GC/MS 采集软件 B.07.06 采集数据，并 使用 MassHunter 定性分析软件 B.07.00 和 MassHunter 定量分析软件 B.09.00 进 行分析。


结果与讨论 ：EMR-Lipid 样品前处理 EMR-Lipid dSPE 净化专门针对油基质中的 PAH 分析进行了改进。南瓜籽油是一种多 脂疏水性基质，与高度疏水的 PAH 分析 物发生强结合。EMR-Lipid dSPE 净化通常 需要在样品混合物中使用 50% 的水以实 现有效的脂质去除。然而，加入 50% 水 会降低 PAH 的溶解度并对分析物的回收 率产生不利影响；因此，将 EMR-Lipid 吸 附剂活化所用的水量减少至 2.5 mL（常 规为 5 mL）。然后将南瓜籽油提取物立 即加入 EMR-Lipid 吸附剂中，确保其与吸 附剂的相互作用最大化。通常建议采用 EMR–Polish dSPE 去除残留的水，但是 对于 GC/MS/MS 分析，这种一步除水法 不足以满足要求，需要采用额外的干燥步 骤。因此，使用 PSA/C18/MgSO4 dSPE 净化进一步净化基质并完全去除水。为了 在 GC/MS/MS 分析中实现所需的 PAH 定 量限，对样品进行浓缩并用 10 倍体积的 异辛烷将其复溶。