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酚类化合物干扰及对策如何

提供者:上海柏欣仪器设备厂   发布时间:2012/5/22 10:04:28  阅读次数:4255次  进入该公司店铺

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杨**
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很多植物团体尤其是植物的果实(如水果、樱桃、李子、蒲桃等)和树木类植物中富含酚类化合物。酚类事物的含量会随着植物的成长而增加。故而从幼嫩的植物材料中更容易提出取得RNA。这个之外,针叶类植物的针叶中多酚的含量比在落叶植物的叶子中要高得多。在植物材料匀浆时,酚类事物会开释出来,氧气化后使匀浆液变为褐色,并随氧气化程度的增加而加大深度,这一现象被称为褐化效应(browning effect)。被氧气化的酚类化合物(如醌类)能与RNA牢稳地接合,因此影响RNA的离合醇化。但Newbury等发觉RNA提出取得的难易程度与材料中酚类事物的总量之间并无有关性,因为这个觉得不是全部的酚类化合物都影响RNA的提出取得。但普通觉得所说的的“缩减鞣质”即聚合多羟基黄酮醇类事物(如原花色素类事物)是影响RNA提出取得的一类化合物。到现在为止去除酚类化合物的普通路径是在提出取得的起初阶段避免其被氧气化,而后再将其与RNA分开。

1.1 避免酚类化合物被氧气化的办法

恢复剂法:普通在提出取得缓和冲突液中参加(-巯基酒精、二硫苏糖醇(DTT)或半胱氨酸来避免酚类事物被氧气化,有时候提出取得液中(-巯基酒精的液体浓度可高达2百分之百。(-巯基酒精等还可以打断多酚氧气化酶的二硫键而使之失活。Su等觉得在过夜沉淀RNA时参加(-巯基酒精(终液体浓度1百分之百)可以避免在此过程中酚类化合物的氧气化。硼氢化钠(NaBH4)是一种可恢复醌的恢复剂,用它处置后提出取得缓和冲突液的褐色可被消减,醌类化合物可被恢复成多酚化合物。

螯合剂法:螯合剂聚乙烯pyrrole烷酮(PVP)和聚乙烯聚pyrrole烷酮(PVPP)中的CO-N=基有很强的接合多酚化合物的有经验,其氢结合能力随着多酚化合物中芳环羟基数目的增加而增强。原花色素类事物中包括很多芳环上的羟基,故而可以与PVP或不溶性的PVPP形成牢稳的复合物,使原花色素类事物不可以变成多酚氧气化酶的底物而被氧气化,并可以在往后的抽提步骤中被去掉除掉。用PVP去除多酚时pH值是一个关紧的影响因素,在pH8.0以上时PVP接合多酚的有经验会迅疾减低。当原花色素类东西质较大时,单独运用PVPP没有办法去除全部的这类化合物,故而需求与其他办法接合运用。

Tris-硼酸法:假如提出取得缓和冲突液中包括Tris-硼酸(pH7.5),那里面的硼酸可以与酚类化合物有赖氢键形成复合物,因此制约了酚类事物的氧气化及其与RNA的接合。这一办法非常管用,所以Lбpez-Gбmez等在提出取得缓和冲突液中不再参加其他恢复剂。但假如Tris-硼酸液体浓度过高(>0.2M)则会影响RNA的回收率。

牛血清白蛋白(BSA)法:原花色素类事物与BSA间可萌生大致相似于抗原-抗体间的互动,形成可溶性的或不溶性的复合物,减小了原花色素类事物与RNA接合的机缘,因为这个增长了RNA的产量。BSA与PVPP接合运用提出取得效果会更好。因为BSA中往往包括RNase,故而在运用时要参加肝素以制约RNase的活性。

丙酮法:Schneiderbauer等用-70℃的丙酮抽提冷冻研磨后的植物材料,可以管用地从云杉、松树、水青冈等富含酚类化合物的植物材料中离合到高品质的RNA。

Guillemant等和Ainsworth觉得低pH值(pH5.5)的提出取得缓和冲突液可以避免酚类化合物的离子化和进一步的氧气化。

1.2 酚类化合物的去除

经过Li+或Ca2+沉淀RNA的办法可以将未被氧气化的酚类化合物去除。与PVP、不溶性PVPP或BSA接合的多酚,可以直接经过离心去洗雪,或在苯酚、氯仿抽提时去掉除掉。Manning利用高液体浓度的2-丁氧气酒精(50百分之百)来沉淀RNA,而多酚溶解于2-丁氧气酒精中而被去掉除掉。而后用含50百分之百 2-丁氧气酒精的缓和冲突液荡涤RNA沉淀以去除遗留的多酚。他觉得纵然多酚被氧气化,其氧气化产物仍可以溶解在高液体浓度2-丁氧气酒精溶液中而被去除,无须再用NaBH4来处置。


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