李斯特菌动力生化试剂盒

HiMotility™Biochemical Kit for Listeria

概况

该试剂盒为标准化的显色检测系统，通过李斯特菌特异性的动力学、糖发酵和生化反应进行鉴定。微生物的发酵反应，引起培养基颜色发生变化。

用途

鉴定李斯特菌

使用说明

待鉴定菌种应先进行分离和纯化。可在PALCAM琼脂（货号：M1064）上挑取一个菌落，接种在５ml脑心浸膏肉汤（货号：M210）中，在35-37℃培养6-8小时，直到接种液浊度位于0.5-1.0McFarland标准之间。

无菌打开试剂盒，撕掉封条。划线接种第1孔，不要接种第2孔。接下来用接种环接种第3至第12孔。接种液应到达孔底部。在35℃-37℃孵育18-24小时。

结果判定

依据结果诠释表。在24-48小时孵育期结束后，在第4孔、第5孔和第6孔，分别添加如下试剂：

1) 动力试验+七叶苷水解试验：第1孔和第2孔

动力：有动力则菌落生长从第1孔转移到第2孔，伴随培养基变黑。

七叶苷水解：阳性则第1孔变黑，有动力则第2孔也变黑。

2）触酶试验：第3孔

用接种环刮取第1孔内表面，将接种环蘸到含3%H₂O₂的干净小试管中。

接种环表面冒泡为阳性。

接种环表面没有冒泡为阴性。

注意：3%的H₂O₂需新鲜配置。

3）硝酸盐还原试验：第4孔

加1-2滴对氨基苯磺酸（货号：R015）和1-2滴N,N-二甲基-1-萘胺（货号：R009）

立即出现粉红色为阳性

颜色无变化为阴性

4）伏-普试验：第5孔

加3-4滴Barritt试剂A(货号：R029)和1-2滴Barritt试剂B（货号：R030）

10分钟内出现粉红色为阳性

无颜色变化或有轻微变化为阴性。

5）甲基红试验：第6孔

加1-2滴甲基红试剂（货号：I007）

试剂保持红色为阳性

试剂脱色变黄为阴性

6）糖发酵试验：第7孔-第12孔

酸产生导致培养基颜色由红变黄，为阳性反应。

如果仍保持红色，则为阴性。

12种生化反应

鉴定的李斯特菌物种

格氏李斯特氏菌（Listeria grayi）

单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）

英诺克李斯特菌（Listeria innocua）

斯氏李斯特氏菌（Listeria seeligeri）

伊氏李斯特氏菌伊氏亚种（Listeria ivannovii Sub sp. ivannovii）

伊氏李斯特菌伦敦亚种（Listeria ivannovii Sub sp. londoniesis）

威氏李斯特氏菌（Listeria welshimeri）

储存条件及保质期

2℃-8℃；12个月

引用文献

1.Jitender Singh,etal. A Molecular Beacon-Based Duplex Real-Time Polymerase Chain ReactionAssay for Simultaneous Detection of Escherichia coli O157:H7 ａnd Listeriamonocytogenes in Milk ａnd Milk Products. Foodborne Pathogens andDisease. Dec 2009. 6(10). http://doi.org/10.1089/fpd.2009.0310.

2.Singh, J., Batish,V.K. & Grover, S. Molecular beacon based real-time PCR assay forsimultaneous detection of Listeria monocytogenes ａnd Salmonella spp. in dairyproducts. Dairy Science & Technol. (2011) 91: 373. https://doi.org/10.1007/s13594-011-0007-8