通用名：鸡禽流感病毒IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名：Diagnostic Kit for Antibodies to Avian Influenza Virus (ELISA)

【包装规格】 96T/盒

【预期用途】 禽流感（Avian influenza，AI）是目前危害国内养禽业的一种急性接触性病毒性传染病。疫苗免疫是预防和控制禽流感发生的最有效途径，而免疫后抗体水平的高低反映实际的疫苗免疫效果，直接关系到免疫鸡群对禽流感病毒的抵抗力。

本试剂盒适用于不同品种、不同日龄鸡的血清中禽流感病毒特异性抗体的检测。可用于禽流感（全病毒）疫苗免疫效果评价、免疫时间的确定分析、地区鸡群禽流感免疫状况评价等。

【原 理】

本试剂盒系由预包被禽流感病毒（AIV）重组抗原的微孔板和酶标记二抗及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测鸡血清或血浆中禽流感病毒特异性抗体。实验时，在包被板中加入对照血清和稀释的待检血清，经温育后，若样品中含有禽流感病毒的特异性抗体，则将与包被板上抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标二抗，与包被板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶结合物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有特异性抗体。

【储存及有效期】

于2～8℃避光保存，有效期为12个月。

包被板开封后请于2～8℃避光保存，使用期限为1个月。

【试剂盒组成】

【样品制备】 取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品短期可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。

【样品稀释】 用样品稀释液将待检血清按100倍稀释（如5μl血清加入495μl样品稀释液中，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。
【洗涤液配制】浓缩洗涤液使用前应恢复至室温（25℃左右），并摇动使沉淀的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。
【试验操作方法】

1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。

2.取所需用量微孔板条，设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。

3.空白对照孔加样品稀释液100μl；阴性/阳性对照孔分别加入阴性/阳性对照血清100μl；样品孔每孔加入稀释后的血清样品100μl。

4.混匀，置37℃反应30分钟。

5.扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。

6.每孔加酶标记物100μl（空白孔除外）。置37℃反应30分钟。

7.洗涤，同步骤5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，37℃避光反应10分钟。

9.每孔加终止液50μl，混匀，用空白孔调零，于450nm(630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A450）。

【结果判定】

1.阴性对照：正常情况下，阴性对照孔A值≤0.10；

2.阳性对照：正常情况下，阳性对照孔A值≥0.6；

3.临界值（C.O）的计算：C.O=0.13+阴性对照孔均值（阴性对照孔均值低于0.07时以0.07计算）；

4.结果判定：样品A值≥C.O为阳性；样品A值＜C.O为阴性。

【试验方法的局限性】

该试验仅作为定性检测鸡血清或血浆中禽流感病毒IgG抗体，根据A值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。

【注意事项】

1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。

2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。

3.微孔板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的微孔板需放入有干燥剂的密封袋中保存。

4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以完全溶解。

5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。

6.用于检测的样品应保持新鲜。

7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。

8.不同批号试剂组分不得混用。