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技术文章
鸡禽流感病毒IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法） 使用说明书
点击次数：3720 发布时间：2019/12/16 10:40:14
【产品名称】
通用名：鸡禽流感病毒IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
英文名：Diagnostic Kit for Antibodies to Avian Influenza Virus (ELISA)
【包装规格】 96T/盒
【预期用途】 禽流感（Avian influenza，AI）是目前危害国内养禽业的一种急性接触性病毒性传染病。疫苗免疫是预防和控制禽流感发生的最有效途径，而免疫后抗体水平的高低反映实际的疫苗免疫效果，直接关系到免疫鸡群对禽流感病毒的抵抗力。
本试剂盒适用于不同品种、不同日龄鸡的血清中禽流感病毒特异性抗体的检测。可用于禽流感（全病毒）疫苗免疫效果评价、免疫时间的确定分析、地区鸡群禽流感免疫状况评价等。
【原 理】
本试剂盒系由预包被禽流感病毒（AIV）重组抗原的微孔板和酶标记二抗及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测鸡血清或血浆中禽流感病毒特异性抗体。实验时，在包被板中加入对照血清和稀释的待检血清，经温育后，若样品中含有禽流感病毒的特异性抗体，则将与包被板上抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标二抗，与包被板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶结合物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有特异性抗体。
【储存及有效期】
于2～8℃避光保存，有效期为12个月。
包被板开封后请于2～8℃避光保存，使用期限为1个月。
【试剂盒组成】
| 1. | 禽流感病毒抗原预包被微孔板条 | 96T×1 |
| 2. | 酶标记物 (红盖) | 11ml×1 |
| 3. | 样品稀释液 (黄盖) | 50ml×1 |
| 4. | 20X浓缩洗涤液 (透明盖) | 40ml×1 |
| 5. | 底物液A (白盖) | 7ml×1 |
| 6. | 底物液B (黑盖) | 7ml×1 |
| 7. | 终止液 (黄盖) | 7ml×1 |
| 8. | 阳性对照 (红盖，已灭活) | 0.5 ml×1 |
| 9. | 阴性对照 (绿盖，已灭活) | 0.5 ml×1 |
| 10. | 盖板膜 | 1张 |
| 11. | 自封袋 | 1个 |
| 12. | 说明书 | 1份 |
【样品制备】 取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品短期可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。
【样品稀释】 用样品稀释液将待检血清按100倍稀释（如5μl血清加入495μl样品稀释液中，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。
【洗涤液配制】浓缩洗涤液使用前应恢复至室温（25℃左右），并摇动使沉淀的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。
【试验操作方法】
1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。
2.取所需用量微孔板条，设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。
3.空白对照孔加样品稀释液100μl；阴性/阳性对照孔分别加入阴性/阳性对照血清100μl；样品孔每孔加入稀释后的血清样品100μl。
4.混匀，置37℃反应30分钟。
5.扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。
6.每孔加酶标记物100μl（空白孔除外）。置37℃反应30分钟。
7.洗涤，同步骤5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，37℃避光反应10分钟。
9.每孔加终止液50μl，混匀，用空白孔调零，于450nm(630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A450）。
【结果判定】
1.阴性对照：正常情况下，阴性对照孔A值≤0.10；
2.阳性对照：正常情况下，阳性对照孔A值≥0.6；
3.临界值（C.O）的计算：C.O=0.13+阴性对照孔均值（阴性对照孔均值低于0.07时以0.07计算）；
4.结果判定：样品A值≥C.O为阳性；样品A值＜C.O为阴性。
【试验方法的局限性】
该试验仅作为定性检测鸡血清或血浆中禽流感病毒IgG抗体，根据A值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。
【注意事项】
1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。
2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。
3.微孔板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的微孔板需放入有干燥剂的密封袋中保存。
4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以完全溶解。
5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。
6.用于检测的样品应保持新鲜。
7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。
8.不同批号试剂组分不得混用。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
