产品及特点支原体和亲缘关系很近的无胆甾原体、螺旋体统称霉形体。霉形体是目前发现的最小的、最简单的原核生物。它们缺乏细胞壁、有变形能力、能通过滤菌器、 可在无生命培养基中生长繁殖,成为细胞培养中常见的一种污染源,严重影响细胞生长率、细胞形态、基因表达、细胞代谢和细胞活力。因此快速灵敏检测支原体具有重要意义。本产品就是为此目的根据 PCR 原理开发的试剂盒,它具有下列特点:
1.即开即用,用户只需要提供样品 DNA 模板。
2.引物和探针经过优化,灵敏性高。
3.提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4.特异性高,引物是根据支原体高度保守区设计,不会跟其他微生物的 DNA 发生交叉反应。
5.本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 PCR 反应。
6.本产品只能用于科研。
规格及成分成分编号十孔盒包装
2×Probe qPCR MagicMix190303500 μL(本色盖)
荧光 PCR 专用模板稀释液1807011 mL(黄盖)
支原体通用探针法 qPCR 引物
混合液15-74000yw100 μL(白盖)
支原体通用 qPCR 探针15-74000pb100 μL(棕色管)
支原体通用 PCR 阳性对照
(1×10E8 拷贝/μL)60908-74000pc50 μL(黄盖)
天净沙核酸释放剂(试用装)6120220 次(1mL,绿盖)
使用手册15-74000sc1 份
运输及保存低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。
自备试剂样品 DNA。
使用方法一、稀释标准曲线样品(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原, 本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。1.标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。
2.用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液,最好用带芯枪头, 下同)。
3.在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震
超纯水-6 μL-
第 7 步所得标准曲线样品稀释液
(2-7 号)
-
-各 6μL(2 号样到 2
号管,3 号样到 3 号管…)
11.盖上盖子后上机,按下面参数进行 PCR:
四、数据处理
12.如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品RNA 浓度的 log 值,再推算出其浓度。
13.如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品,如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性,如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间,则重复一次。重复实验的 Ct
值如果大于或等于 40 则为阴性,如果小于 40,则为阳性。
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