小鼠肝炎病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒_产品说明_仪器仪表技术文献

小鼠肝炎病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

提供者：上海雅吉生物科技有限公司发布时间：2019/11/20 9:19:46 阅读次数：3882次进入该公司店铺

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产品及特点

小鼠肝炎病毒(Mouse Hepatitis Virus，MHV)是一种RNA病毒，病毒存在于血液和内脏，特别是肝和肾，也见于粪尿中，对幼鼠有高度的传染性，小鼠肝炎是由MHV所致的1种特有的传染病，带毒小鼠分布于全世界，但在正常情况下大多呈不显性感染，只在应激因素激发下才能成为致死性疾病，主要为肝炎和脑炎，因此小鼠肝炎病毒的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用。本产品基于PCR原理开发。它具有下列特点：

一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。
根据小鼠肝炎病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。
基于染料法qRT-PCR检测，灵敏度比常规RT-PCR高10-100倍，可以达到至少1000拷贝/反应。
使用一管式qRT-PCR技术，RT和PCR两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。
本产品足够50次30μL体系的RT-PCR，只能用于科研，不能用于临床。

规格及成分

成份	编号	十孔盒包装
2×qRT-PCR 缓冲液	190101a	500 μL（棕色管）
10×qRT-PCR酶混合液	190101b	100 μL（红盖）
ROX染料I	190101c	50μL（棕色管）
ROX染料II	190101d	50μL（棕色管）
荧光PCR专用模板稀释液	180701	1mL（亮黄盖）
小鼠肝炎病毒RT-PCR引物混合液	14-54100yw	100μL（白盖）
小鼠肝炎病毒RT-PCR阳性对照（1×10E8拷贝/μL）	14-54100pc	50μL（黄盖）
天净沙核酸释放剂试用装	61202	20次（1mL，绿盖）
使用手册	14-54100sc	1份

运输及保存

低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。阳性对照需要因易污染其他成分需要单独放置。本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供RNA片段作为阳性对照。

自备试剂

样品RNA

使用方法

一、稀释阳性对照（以10E2-10E7这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原。

标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。
在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照(本试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

二、样品RNA的制备

如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL上步制备的阳性对照梯度稀释液中的第4号（浓度为1×10E4拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝）再加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求）。可以用水作为制备的阴性对照。
用自选方法纯化N+2个样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。

三、设置RT-PCR反应（20μL体系，在样品制备室进行）

如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板），1个用于PCR阳性对照（用第4号阳性对照稀释液做模板）。下面只描述定量分析的步骤，定性分析只是把6个标曲反应缩减成1个，其余不变。
在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，阳性对照样品要等所有管子盖上盖子后最后加）：