甲型肝炎病毒 RT-PCR 检测试剂盒_分析方法_仪器仪表技术文献

甲型肝炎病毒 RT-PCR 检测试剂盒

提供者：上海雅吉生物科技有限公司发布时间：2019/8/20 8:45:42 阅读次数：3681次进入该公司店铺

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产品及特点	甲型肝炎病毒(Hepatitis A Virus，HAV)会引起甲型肝炎，该病毒病毒主要通过粪、口途径传播，传染源多为病人。甲型肝炎的潜伏期为 15～45 天，易感群体多为儿童及青年，发病率随年龄增长而递减，感染后临床表现多从发热、疲乏和食欲不震开始，继而出现肝肿大、压痛、肝功能损害，部份患者可出现黄疸。该病毒的感染对人体健康有较大损害，因此快速灵敏诊断具有重要意义。为此本公司开发了本产品，可用于在科研领域快速定量检测甲型肝炎病毒。它具有下列特点： 1. 一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。 2. 根据甲型肝炎病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。 3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。 4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。 5. 本产品足够 50 次 30μL 体系的 RT-PCR。 6. 本产品只能用于科研，不能用于临床。
规格及成分		成份	编号	十孔盒包装
		5×双酶一管式 RT-PCR Buffer	91202a	200 μL（橙盖）
		MMLV-Taq Mix	91202b	75 μL（红盖）
		超纯水	100935	1 mL（蓝盖）
		甲型肝炎病毒 RT-PCR 引物混合液	13-15700yw	100 μL（白盖）
		甲型肝炎病毒 RT-PCR 阳性对照（1×10E8拷贝/μL）	13-15700pc	50 μL（黄盖）
		天净沙核酸释放剂（试用装）	61202a	20 次（1mL）
		使用手册	13-15700sc	1 份
	注：为避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供甲型肝炎病毒专一的 DNA 片段作为阳性对照。
运输及保存	低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。
自备试剂	样品 RNA
使用方法	一、样品 RNA 的制备 1.如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL甲型肝炎病毒PCR阳性对照的10000倍稀释的（稀释后浓度为1×10E4拷贝/μL，10μL相当于1万

拷贝，可以将10μL原液加入到990μL自备TE溶液中，充分混匀，此为100倍稀释液。再取10μL此稀释液加入到990μL自备TE溶液中，充分混匀，此为10000倍稀释液）再加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求）。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品RNA。

2. 用自选方法纯化N+2个样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送20次天净沙核酸释放剂试用装，其使用手册可以从本公司网站搜索天净沙核酸释放剂或产品编号61202下载。

二、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系）

3. 如果有N+2个样品，则标记N+4个PCR管（额外增加的两个管一个是RT-PCR

阳性对照，另一个是RT-PCR阴性对照）并按照下表在PCR管中加入下列成分：

成份	N+2 个样品管	RT-PCR 阴性对照	RT-PCR 阳性对照
5×双酶一管式 RT-PCR Buffer	各 4 μL	4 μL	4 μL
甲型肝炎病毒 RT-PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个制备的样品	各 12.5 μL	不加	不加
甲型肝炎病毒 RT-PCR 阳性对照 10000 倍稀释液	不加	不加	12.5 μL
MMLV-Taq Mix	1.5 μL	1.5 μL	1.5 μL