人类免疫缺陷病毒2型（HIV-2）主要流行于西非，其患者血浆中病毒RNA水平一直以来是评判抗病毒治疗效果或预测疾病进展的重要指标。但是，经抗病毒治疗后血浆HIV-2 RNA已达到基线水平感染者的血液、精液或淋巴结中仍可以检测到HIV-2 前病毒DNA的存在，构成病毒储藏库，对清除HIV-2病毒构成严重阻碍。所以在病毒载量已经检测不到的情况下，HIV-2 前病毒DNA水平可以作为除Ｔ细胞计数和病毒载量之外的另一标志物。因此检测HIV-2 前病毒DNA具有重要意义。本产品具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供病毒DNA模板。
2.引物经过精心优化，专一性强，只扩增HIV-2前病毒，与其他病毒没有交叉反应。
3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4.PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。
5.本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次，但只能用于科研。
成 份编号十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0908051 mL（亮黄盖）
超纯水1009351 mL（蓝色）
HIV-2前病毒PCR引物混合液13-59200yw100 μL（白盖）
HIV-2前病毒PCR阳性对照
（1×10E8拷贝/μL）13-59200pc50 μL（黄盖）
天净沙核酸释放剂6120250次（9 mL）
使用手册13-59200sc1份
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。HIV-2前病毒PCR阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
样品DNA。
一、样品DNA的制备
1.用自选方法纯化N+2个样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送15次天净沙核酸释放剂试用装，其使用手册可以从本公司网站天净沙核酸释放剂或产品编号61202下载。
2.如果有N个样品，则需要做N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在200μL水中加10μL HIV-2前病毒PCR阳性对照的10000倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用200μL水。提取结束后最后得到200μL模板DNA（每个样品）放冰上待用，溶解DNA沉淀的溶液不能少于200μL，否则PCR抑制物很可能会抑制PCR。
二、设置PCR反应（40μL体系）
3.对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：
成分N+2个
样品管PCR阴性对照PCR阳性对照
PCR MagicMix 3.0 各20 μL20 μL20 μL
HIV-2前病毒PCR引物混合液各2 μL2 μL2 μL
N+2个样品DNA模板各18 μL--
PCR阴性对照（水）-18 μL-
PCR阳性对照（HIV-2前病毒PCR阳性对照的10000倍稀释液）--18 μL
4.按下表设置PCR反应：
过程温度时间
预变性95℃5 min
PCR反应
（35个循环）95℃45 sec
54℃45 sec
72℃30 sec
最后延伸72℃10 min
三、电泳检测
5.取10-20 μL PCR产物。电泳检测PCR产物。本产品提供的PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加loading buffer。预期的PCR产物长度为319bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释10倍后重复PCR扩增以排除PCR抑制剂的感染。
HIV-2前病毒可视化LAMP扩增试剂盒
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